JoVE Logo
АВТОРЫ
СВЯЖИТЕСЬ С НАМИ

Войдите в систему

Для просмотра этого контента требуется подписка на Jove Войдите в систему или начните бесплатную пробную версию.

В этой статье

  • Резюме
  • Аннотация
  • Введение
  • протокол
  • Результаты
  • Обсуждение
  • Раскрытие информации
  • Благодарности
  • Материалы
  • Ссылки
  • Перепечатки и разрешения

Резюме

This protocol describes the forced swim test, which is used for the study of depressive-like behavior in rodents. This procedure involves placing an animal in a container filled with water that eventually will lead to the exhibition of immobility behavior, which is considered to reflect behavioral despair.

Аннотация

The goal of the present protocol is to describe the forced swim test (FST), which is one of the most commonly used assays for the study of depressive-like behavior in rodents. The FST is based on the assumption that when placing an animal in a container filled with water, it will first make efforts to escape but eventually will exhibit immobility that may be considered to reflect a measure of behavioral despair. This test has been extensively used because it involves the exposure of the animals to stress, which was shown to have a role in the tendency for major depression. Additionally, the FST has been shown to share some of the factors that are influenced or altered by depression in humans, including changes in food consumption, sleep abnormalities and drug-withdrawal-induced anhedonia. The main advantages of this procedure are that it is relatively easy to perform and that its results are easily and quickly analyzed. Moreover, its sensitivity to a broad range of antidepressant drugs that makes it a suitable screening test is one of the most important features leading to its high predictive validity. Despite its appeal, this model has a number of disadvantages. First, the issue of chronic augmentation is problematic in this test because in real life patients need to be treated for at least several weeks before they experience any relief from their symptoms. Last, due to the aversiveness of the FST, it is important to take into account possible influences it might have on brain structure/function if brain analyses are to be carried out following this procedure.

Введение

Депрессия является опасным для жизни психическое расстройство и серьезной проблемой общественного здравоохранения во всем мире с частотой 5% и преобладанием 15-20% в течение жизни. Кроме того, предполагается, что к 2020 году депрессия станет в тройку вкладчиков бремени болезней в 1,2 раза. Депрессия связана с инвалидностью, снижение качества жизни, увеличение расходов, связанных со здоровьем и считается основным фактором риска для многих заболеваний, в том числе сердечно-сосудистых, метаболических и нервно-психических расстройств 3,4 .current фармако-терапевтических методов лечения ограниченную эффективность и связаны с многие вредные побочные эффекты 5,6. Таким образом, лучшее понимание патофизиологии этого заболевания, наряду с развитием инновационных и усовершенствованных методов лечения остается решающим фактором. Таким образом, модели на животных необходимы для продвижения исследований в этой области.

Есть много моделей, используемых для изучения этого заболевания ( например, сахароза предпочтение тест, хвост подвеска тест) с тесте принудительного плавания (ФСТ, также известного как тест Порсолта после разработчиком этой модели 7,8) является одним из наиболее часто используемых тестов 7,9-12.

В ФСТ животное помещают в емкость с водой, из которой он не может избежать. Животное сначала попытаться убежать, но в конечном итоге будет проявлять неподвижности (т.е. с плавающей при отсутствии какого-либо движения те, которые необходимы для поддержания нос над водой, за исключением). ФСТ является очень популярной моделью в исследованиях на животных для целого ряда причин. Во-первых, это предполагает воздействие на животных на стресс, который был показан, чтобы иметь роль в склонности к глубокой депрессии 12-14. Кроме того депрессии часто рассматривается как отсутствие способности обрабатывать со стрессом 15-17. Во-вторых, фармакологическое лечение антидепрессантами до начала испытания было показано, чтобы уменьшить неподвижность в ФСТ 18-23. Таким образом, он часто используется как скрининг-анализа для новых соединений с потенциальными свойствами антидепрессанта 15-17,24. Кроме того, ФСТ было показано, чтобы поделиться некоторыми из факторов, которые повлияли на или измененных депрессии у людей, таких, как изменения в потреблении продуктов питания, нарушений сна и наркотиков вывода, вызванной ангедония 15-17,24. Это также причина, почему этот тест иногда используется для оценки депрессивного типа поведения у мутантных мышей, с увеличением или уменьшением базальной неподвижности (по сравнению с «дикого типа» мышей) 25,26.

протокол

ПРИМЕЧАНИЕ: Все экспериментальные протоколы были одобрены Международным комитетом по уходу за животными и использованию в Израиле. Все усилия были сделаны, чтобы минимизировать число животных, используемых и их страдания.

1. Подготовка к Тест принудительного плавания

  1. Используйте две смежные комнаты. Используйте одну комнату как "зал ожидания" для проведения животных до поведенческого тестирования и другой для проведения процедуры.
  2. Подготовка прозрачные цилиндрические стеклянные контейнеры (единственное ограничение на количество контейнеров свободное пространство) площадью 50 см в высоту и диаметр 20 см.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Можно запустить несколько животных одновременно в той же комнате. Если это так, выделить контейнеры друг от друга с помощью темного экрана таким образом, чтобы животные не будут видеть друг друга во время процедуры.
  3. Подготовка видео камеру (ы) перед контейнеров, так что каждая камера воспринимает один или несколько контейнеров таким образом, что Wплохо позволит четкое наблюдение за поведением животных в дальнейшем при просмотре отснятого материала.
  4. Подготовка чистые сушки клетки, тепловые лампы и тепла колодки для животных, которые завершили процедуру, чтобы избежать переохлаждения. Убедитесь, что нижняя часть Кейдж промокашки и изменить его, когда он намокнет. Не ставьте клетки в комнату тестирования.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Убедитесь в том, чтобы не перепутать животных от различных домашних клетках в то время как они находятся в переходном сушки клетках.

2. Животное Обращение Перед тестированием

  1. Дом животные в номере с 12 ч циклом свет / темнота.
  2. В дни проведения эксперимента дают животным свободный доступ к пище и воде, для конкретного времени, проведенного в процедурной комнате, кроме.
  3. При использовании крыс, обработки животных в течение примерно 2 мин в день, 5 дней до начала экспериментальной процедуры.

3. Порядок подготовки

Процедура осуществляется по-разному для крыс и мышей.

ПРИМЕЧАНИЕ: Для обеих мышей и крыс, наблюдать за животными, в то время как они находятся в воде во все времена. В случае животное появляется в серьезной беде (например, очень устал, не может оставаться в обращении) удалить животное из воды и исключить его из эксперимента.

  1. Для мышей - Существует один сеанс 6 мин долго, делятся на тест-драйв (первые 2 мин) и теста (в прошлом 4 мин).
    1. Для того, чтобы мышей, чтобы приспособиться к среде тестирования, перевозки животных в их клетках по крайней мере, за 30 мин до тестирования поведения в комнату ожидания.
    2. Заполните цилиндры с водопроводной водой при 25 ° С и регулировать глубину воды в соответствии с размером 'мыши, так что он не может касаться дна контейнера с задних лапах.
    3. Отметить цилиндр с номером животного с целью идентификации животного в дальнейшем при просмотре кадры.
    4. Включите видео камеры / с, а затем поместить каждую мышь в заполненной водой емкости цилиндра в течение 6 мин.
    5. После 6 мин прошло, выключите камеру / с, снимите мышь из контейнера и поместите его в переходном сушки клетке с инфракрасной лампой над ним и тепла площадку под ним. Мыши должны быть тесно и непрерывно контролируется во время восстановления в этой клетке. Для этой цели можно поместить термометр на уровне мышей чтобы убедиться, что температура в клетке не превышает 37 ° С. Кроме того, разместить клетку такое, что не все из них падает под лампой или по панели; это позволяет мыши, чтобы перейти к более прохладное место, если это необходимо.
    6. Изменение воды после каждого сеанса, чтобы избежать какого-либо влияния на следующей мыши.
  2. Для крыс - Есть 2 заседания, 24 часа в сутки друг от друга. Первая сессия является этап предварительного тестирования (15 мин) и второй сеанс стадии испытаний (5 мин).
    1. Для того, чтобы крыс, чтобы приспособиться ктестирование окружающей среды, транспорта животных в их клетках по крайней мере, за 30 мин до тестирования поведения в комнату ожидания.
    2. Заполните цилиндры с водопроводной водой при 23 ± 1 ° С и регулировать глубину воды в зависимости от размера крысы, так что он не может касаться дна контейнера с задних лапах.
    3. Отметить цилиндр с номером животного с целью идентификации животного в дальнейшем при просмотре кадры.
    4. Поместите каждую крысу в заполненной водой емкости цилиндра в течение 15 мин.
    5. После 15 мин прошло удалить крысу из контейнера и поместите его в переходном сушки клетке с инфракрасной лампой над ним и тепла площадку под ним. Крыса должна быть тесно и непрерывно контролируется во время восстановления в этой клетке. Для этой цели можно поместить термометр на уровне крысы чтобы убедиться, что температура в клетке не превышает 37 ° С. Кроме того, разместить клетку таким образом, что не все из них FAзаполняет под лампой или по панели; это позволяет крыса, чтобы перейти к более прохладное место, если это необходимо.
    6. Изменение воды после каждого сеанса, чтобы избежать какого-либо влияния на следующей крысы.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Это конец предтестовой этапе.
    7. Двадцать четыре часа спустя, для того, чтобы крыс, чтобы приспособиться к среде тестирования, перевозки животных в их клетках по крайней мере, за 30 мин до тестирования поведения в комнату ожидания.
    8. Заполните цилиндры с водопроводной водой при 23 ± 1 ° С и регулировать глубину воды в зависимости от размера крысы, так что он не может касаться дна контейнера с задних лапах.
    9. Отметить цилиндр с номером животного с целью идентификации животного в дальнейшем при просмотре кадры.
    10. Включите видеокамеру / с, а затем поместить крысу в заполненной водой емкости цилиндра в течение 5 мин. Убедитесь, что каждая крыса испытывается в одном контейнере и положение в комнате, как в предыдущий день.
    11. После 5 мин прошло включите камеру / с, снимите крысу из контейнера и поместите его в переходном сушки клетке с инфракрасной лампой над ним и тепла площадку под ним. Крыса должна быть тесно и непрерывно контролируется во время восстановления в этой клетке. Для этой цели можно поместить термометр на уровне крысы чтобы убедиться, что температура в клетке не превышает 37 ° С. Кроме того, разместить клетку такое, что не все из них падает под лампой или по панели; это позволяет крыса, чтобы перейти к более прохладное место, если это необходимо.
    12. Изменение воды после каждого сеанса, чтобы избежать какого-либо влияния на следующей крысы.
      Примечание: Это конец стадии испытаний.

4. Поведенческие кодирования

Для мышей, код последнюю 4 мин, определенный на стадии тестирования. Для крыс, код 5 мин от стадии испытаний.

  1. Код продолжительность времени, затраченного как "Иммобиле", если мышь плаваетпри отсутствии какого-либо движения для тех, которые необходимы для поддержания нос над водой, кроме.
  2. Код продолжительность времени, затраченного как "Борьба / восхождение", если быстрые движения передних конечностей наблюдаются так, что передние лапы сломать поверхности воды.
  3. Код продолжительность времени, проведенного в "Плавание", если движение передних конечностей или задних конечностей в детском моды наблюдается.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Можно использовать альтернативный способ кодирования такого поведения, это включает в себя метод времени выборки. Оценить плавание, изо всех сил или неподвижность, как частота эпизодов на каждые 5 сек на тестовой сессии.

Результаты

Следующие результаты основаны на неопубликованных данных нашей лаборатории. В этом эксперименте, самки мышей взрослых ICR были протестированы после 3 недель лечения с селективным ингибитором обратного захвата серотонина (СИОЗС) эсциталопрам или роман лечение травами анти-депрессивны?...

Обсуждение

ФСТ используется для контроля депрессивное поведение, как и основана на предположении, что неподвижность отражает меру поведенческого отчаяния 3. Основные преимущества этой процедуры заключаются в его сравнительно легко эксплуатации и быстрых результатов. Кроме того, его чувст...

Раскрытие информации

The authors have nothing to disclose.

Благодарности

This research was supported by the Israel Science Foundation (grant No. 738/11), by the National Institute for Psychobiology in Israel (NIPI-7-2011-12), and by the Open University Foundation

Материалы

NameCompanyCatalog NumberComments
ComputerDellIntel® Core™ i3-2120 cpu @ 3.30 GHz, 4 GB ram
CameraVIDOAU-CB422B/W CCD CAMERA 
http://www.vido-europe.com/products_detail.asp?id=33&pcategory=2
Coding softwareBiobserveFST Analysis
http://www.biobserve.com/products/fst/index.html
Heating lampIkeaAA-19025-3ESPRESSIVIO 400.504.46 - 20W G4 Bulb 
http://www.ikea.com/ms/en_US/customer_service/assembly/E/E00050467.pdf
Heating pillowSachsEF-188B38*38cm Heating pillow
http://www.sachs.co.il/eng/lego_tree.php?instance_id=21&actions=show&id=
604

Ссылки

  1. Levinson, D. F. The genetics of depression: a review. Biological psychiatry. 60, 84-92 (2006).
  2. Murray, C. J., Lopez, A. D. Alternative projections of mortality and disability by cause 1990-2020: Global Burden of Disease Study. Lancet. 349, 1498-1504 (1997).
  3. Cryan, J. F., Holmes, A. The ascent of mouse: advances in modelling human depression and anxiety. Nature reviews. Drug discovery. 4, 775-790 (2005).
  4. Thase, M. E. Managing depressive and anxiety disorders with escitalopram. Expert opinion on pharmacotherapy. 7, 429-440 (2006).
  5. Lam, R. W., Kennedy, S. H. Evidence-based strategies for achieving and sustaining full remission in depression: focus on metaanalyses. Canadian journal of psychiatry. Revue canadienne de psychiatrie. 49, 17S-26S (2004).
  6. Dording, C. M., et al. The pharmacologic management of SSRI-induced side effects: a survey of psychiatrists. Annals of clinical psychiatry : official journal of the American Academy of Clinical Psychiatrists. 14, 143-147 (2002).
  7. Porsolt, R. D., Le Pichon, M., Jalfre, M. Depression: a new animal model sensitive to antidepressant treatments. Nature. 266, 730-732 (1977).
  8. Porsolt, R. D., Bertin, A., Jalfre, M. Behavioral despair in mice: a primary screening test for antidepressants. Archives internationales de pharmacodynamie et de therapie. 229, 327-336 (1977).
  9. Cryan, J. F., Markou, A., Lucki, I. Assessing antidepressant activity in rodents: Recent developments and future needs. Trends in Pharmacological Sciences. 23, 238-245 (2002).
  10. Cryan, J. F., et al. Norepinephrine-deficient mice lack responses to antidepressant drugs, including selective serotonin reuptake inhibitors. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 101, 8186-8191 (2004).
  11. Porsolt, R. D., Anton, G., Blavet, N., Jalfre, M. Behavioural despair in rats: A new model sensitive to antidepressant treatments. European Journal of Pharmacology. 47, 379-391 (1978).
  12. Doron, R., et al. A novel herbal treatment reduces depressive-like behaviors and increases BDNF levels in the brain of stressed mice. Life sciences. 94, 151-157 (2014).
  13. Caspi, A., et al. Influence of life stress on depression: Moderation by a polymorphism in the 5-HTT gene. Science. 301, 386-389 (2003).
  14. Kaufman, J., et al. Brain-derived neurotrophic factor-5-HTTLPR gene interactions and environmental modifiers of depression in children. Biological psychiatry. 59, 673-680 (2006).
  15. Anisman, H., Zacharko, R. M. Multiple neurochemical and behavioral consequences of stressors: Implications for depression. Pharmacology and Therapeutics. 46, 119-136 (1990).
  16. Kessler, R. C. The effects of stressful life events on depression. Annual Review of Psychology. 48, 191-214 (1997).
  17. Sullivan, P. F., Neale, M. C., Kendler, K. S. Genetic epidemiology of major depression: Review and meta-analysis. American Journal of Psychiatry. 157, 1552-1562 (2000).
  18. Cryan, J. F., Valentino, R. J., Lucki, I. Assessing substrates underlying the behavioral effects of antidepressants using the modified rat forced swimming test. Neuroscience and biobehavioral reviews. 29, 547-569 (2005).
  19. Detke, M. J., Lucki, I. Detection of serotonergic and noradrenergic antidepressants in the rat forced swimming test: The effects of water depth. Behavioural Brain Research. 73, 43-46 (1996).
  20. Hemby, S. E., et al. Potential antidepressant effects of novel tropane compounds, selective for serotonin or dopamine transporters. Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics. 282, 727-733 (1997).
  21. Bouvard, M., Stinus, L. In the rat forced swimming test, chronic but not subacute administration of dual 5-HT/NA antidepressant treatments may produce greater effects than selective drugs. Behavioural Brain Research. 136, 521-532 (2002).
  22. Page, M. E., Detke, M. J., Dalvi, A., Kirby, L. G., Lucki, I. Serotonergic mediation of the effects of fluoxetine, but not desipramine, in the rat forced swimming test. Psychopharmacology. 147, 162-167 (1999).
  23. Rubalcava, C., Lucki, I. Strain differences in the behavioral effects of antidepressant drugs in the rat forced swimming test. Neuropsychopharmacology. 22, 191-199 (2000).
  24. Cryan, J. F., Mombereau, C., Vassout, A. The tail suspension test as a model for assessing antidepressant activity: Review of pharmacological and genetic studies in mice. Neuroscience and biobehavioral reviews. 29, 571-625 (2005).
  25. Cryan, J. F., Mombereau, C. In search of a depressed mouse: Utility of models for studying depression-related behavior in genetically modified mice. Molecular Psychiatry. 9, 326-357 (2004).
  26. Sang, K. P., et al. Par-4 links dopamine signaling and depression. Cell. 122, 275-287 (2005).
  27. Doron, R., et al. Anxiolytic effects of a novel herbal treatment in mice models of anxiety. Life sciences. 90, 995-1000 (2012).
  28. Doron, R., et al. Escitalopram or novel herbal mixture treatments during or following exposure to stress reduce anxiety-like behavior through corticosterone and BDNF modifications. PloS one. 9, e91455 (2014).
  29. Borsini, F., Meli, A. Is the forced swimming test a suitable model for revealing antidepressant activity. Psychopharmacology. 94, 147-160 (1988).
  30. Reinhold, J. A., Mandos, L. A., Rickels, K., Lohoff, F. W. Pharmacological treatment of generalized anxiety disorder. Expert opinion on pharmacotherapy. 12, 2457-2467 (2011).
  31. Estrada-Camarena, E., Fernandez-Guasti, A., Lopez-Rubalcava, C. Interaction between estrogens and antidepressants in the forced swimming test in rats. Psychopharmacology. 173, 139-145 (2004).
  32. Weiss, J. M., Kilts, C. D. Animal models of depression and schizophrenia. Textbook of Psychopharmacology. , 89-131 (1998).
  33. Armario, A., Gavaldà, A., Martí, J. Comparison of the behavioural and endocrine response to forced swimming stress in five inbred strains of rats. Psychoneuroendocrinology. 20, 879-890 (1995).
  34. Paré, W. P. Open field, learned helplessness, conditioned defensive burying, and forced-swim tests in WKY rats. Physiology and Behavior. 55, 433-439 (1994).
  35. Overstreet, D. H., Friedman, E., Mathe, A. A., Yadid, G. The Flinders Sensitive Line rat: a selectively bred putative animal model of depression. Neuroscience and biobehavioral reviews. 29, 739-759 (2005).
  36. Piras, G., Piludu, M. A., Giorgi, O., Corda, M. G. Effects of chronic antidepressant treatments in a putative genetic model of vulnerability (Roman low-avoidance rats) and resistance (Roman high-avoidance rats) to stress-induced depression. Psychopharmacology. 231, 43-53 (2014).
  37. Bielajew, C., et al. Strain and Gender Specific Effects in the Forced Swim Test. Effects of Previous Stress Exposure. Stress. 6, 269-280 (2003).
  38. Fujisaki, C., et al. An immnosuppressive drug, cyclosporine-A acts like anti-depressant for rats under unpredictable chronic stress. Journal of Medical and Dental Sciences. 50, 93-100 (2003).
  39. Gomez, R., Vargas, C. R., Wajner, M., Barros, H. M. T. Lower in vivo brain extracellular GABA concentration in diabetic rats during forced swimming. Brain research. 968, 281-284 (2003).
  40. Hilakivi-Clarke, L. A., Wozniak, K. M., Durcan, M. J., Linnoila, M. Behavior of streptozotocin-diabetic mice in tests of exploration, locomotion, anxiety, depression and aggression. Physiology and Behavior. 48, 429-433 (1990).
  41. Cryan, J. F., Hoyer, D., Markou, A. Withdrawal from chronic amphetamine induces depressive-like behavioral effects in rodents. Biological psychiatry. 54, 49-58 (2003).
  42. Portella, M. J., et al. Can we really accelerate and enhance the selective serotonin reuptake inhibitor antidepressant effect? A randomized clinical trial and a meta-analysis of pindolol in nonresistant depression. The Journal of clinical psychiatry. 72, 962-969 (2011).
  43. Machado-Vieira, R., Salvadore, G., Luckenbaugh, D. A., Manji, H. K., Zarate, C. A. Rapid onset of antidepressant action: a new paradigm in the research and treatment of major depressive disorder. The Journal of clinical psychiatry. 69, 946-958 (2008).
  44. Bordet, R., Thomas, P., Dupuis, B. Effect of pindolol on onset of action of paroxetine in the treatment of major depression: intermediate analysis of a double-blind, placebo-controlled trial. Reseau de Recherche et d'Experimentation Psychopharmacologique. The American journal of psychiatry. 155, 1346-1351 (1998).
  45. Dulawa, S. C., Holick, K. A., Gundersen, B., Hen, R. Effects of chronic fluoxetine in animal models of anxiety and depression. Neuropsychopharmacology. 29, 1321-1330 (2004).
  46. Willner, P. Animal models of depression: An overview. Pharmacology and Therapeutics. 45, 425-455 (1990).
  47. Jefferys, D., Funder, J. The effect of water temperature on immobility in the forced swimming test in rats. European Journal of Pharmacology. 253, 91-94 (1994).
  48. West, A. P. Neurobehavioral studies of forced swimming: The role of learning and memory in the forced swim test. Progress in Neuro-Psychopharmacology and Biological Psychiatry. 14, 863-877 (1990).
  49. De Pablo, J. M., Parra, A., Segovia, S., Guillamon, A. Learned immobility explains the behavior of rats in the forced swimming test. Physiology and Behavior. 46, 229-237 (1989).
  50. Dal-Zotto, S., Martí, O., Armario, A. Influence of single or repeated experience of rats with forced swimming on behavioural and physiological responses to the stressor. Behavioural Brain Research. 114, 175-181 (2000).
  51. Rittenhouse, P. A., López-Rubalcava, C., Stanwood, G. D., Lucki, I. Amplified behavioral and endocrine responses to forced swim stress in the Wistar-Kyoto rat. Psychoneuroendocrinology. 27, 303-318 (2002).
  52. Overstreet, D. H., Keeney, A., Hogg, S. Antidepressant effects of citalopram and CRF receptor antagonist CP-154,526 in a rat model of depression. European Journal of Pharmacology. 492, 195-201 (2004).
  53. Chaki, S., et al. MGS0039: A potent and selective group II metabotropic glutamate receptor antagonist with antidepressant-like activity. Neuropharmacology. 46, 457-467 (2004).
  54. Mague, S. D., et al. Antidepressant-like effects of κ-opioid receptor antagonists in the forced swim test in rats. Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics. 305, 323-330 (2003).
  55. Molina-Hernández, M., Téllez-Alcántara, N. P. Antidepressant-like actions of pregnancy, and progesterone in Wistar rats forced to swim. Psychoneuroendocrinology. 26, 479-491 (2001).
  56. Estrada-Camarena, E., Fernández-Guasti, A., López-Rubalcava, C. Antidepressant-like effect of different estrogenic compounds in the forced swimming test. Neuropsychopharmacology : official publication of the American College of Neuropsychopharmacology. 28, 830-838 (2003).
  57. Gersner, R., Gordon-Kiwkowitz, M., Zangen, A. Automated behavioral analysis of limbs' activity in the forced swim test. Journal of neuroscience. 180, 82-86 (2009).
  58. Einat, H. Partial effects of the protein kinase C inhibitor chelerythrine in a battery of tests for manic-like behavior in black Swiss mice. Pharmacological reports : PR. 66, 722-725 (2014).

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на использование текста или рисунков этого JoVE статьи

Запросить разрешение

Смотреть дополнительные статьи

97FST

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Конфиденциальность

Условия эксплуатации

Политика

СВЯЖИТЕСЬ С НАМИ

РЕКОМЕНДОВАТЬ БИБЛИОТЕКЕ

НОВОСТИ JoVE

Исследования

Образование

АВТОРЫ

Библиотекарь

О JoVE

Авторские права © 2025 MyJoVE Corporation. Все права защищены