Pharmacological Analysis of Dual-Colored F1 Transgenic Arabidopsis thaliana

Для начала фармакологический анализ двухцветного F1 Arabidopsis thaliana препарируют и удаляют семядоли семидневных трансгенных сеянцев. Добавьте 500 микролитров 30-микромолярного раствора брефельдина А или БФА в пробирку для микроцентрифуги объемом 1,5 миллилитра. Погрузите в нее рассеченную рассаду.

Плотно приложите шприц объемом 10 миллилитров к пробирке микроцентрифуги и приложите вакуум на одну минуту. Извлеките шприц перед инкубацией образца в растворе в течение 30 минут перед визуализацией. Далее рассеченный семидневный саженец погружают в 25-миллимолярный вортманнин.

Примените вакуум на одну минуту перед инкубацией погруженного образца в течение 30 минут. Изучение путей транспортировки ERL-1 в трансгенных растениях показало, что 30-минутное воздействие раствора брефельдина А приводило к обнаружению ERL-1-YFP в больших компартментах, известных как тельца BFA. Было указано, что брефельдин А может блокировать транспорт ERL-1, предполагая рециркуляцию или эндоцитоз ERL-1.

Когда трансгенные препараты обрабатывали вортманнином в течение 30 минут, кольцеобразные структуры, называемые WM-тельцами, выделялись с помощью ERL-1-YFP. Оно показало, что ERL-1-YFP транспортировались в мультивезикулярные тельца, что указывает на то, что ERL-1 следовал по пути к вакуолям для деградации.