Начните с постфиксации ткани DRG, рассеченной из спинного мозга мыши, находящейся под наркозом, в 4%-ном формальдегиде в течение трех часов при комнатной температуре. Затем инкубируйте ткань в 30% сахарозе в PBS при температуре четыре градуса Цельсия в течение ночи. Затем приготовьте базовый ОКТ, добавив ОКТ-компаунд и покрыв верхнюю поверхность алюминиевого блока.
Заморозьте накрытый алюминиевый блок при температуре минус 20 градусов Цельсия в течение пяти-10 минут. Отрежьте верхнюю часть ОКТ толщиной 30 микрометров с помощью криостата, пока ее поверхность не станет такой же плоской, как у базового ОКТ. Отметьте нижнюю часть базовой ОКТ в положении 6:00, прежде чем снять алюминиевый блок с криостата.
Чтобы выполнить ОКТ-встраивание DRG, высушите ткань DRG, поместив ее на сухую чашку Петри и переместив из одного места в другое два или три раза сухим пинцетом. Затем поместите сухой DRG на основание OCT в положение 12:00 с помощью сухого пинцета. Убедитесь, что расстояние между верхним краем DRG и верхним краем основания OCT составляет не менее пяти миллиметров, при этом дорсальная часть находится в положении 12:00, а вентральная часть — в положении 6:00.
Затем добавьте ОКТ круглой или овальной формы, чтобы внедрить всю ткань DRG с DRG в центре. Заморозьте крышку образца ОКТ и ДРГ при температуре минус 20 градусов Цельсия в течение пяти минут. После этого отрежьте верхнюю часть крышки OCT толщиной 30 микрометров до тех пор, пока DRG не станет видна.
