Разложение образцов и расширение полимеризованной ткани

Для начала возьмите горку с полимеризованной архивной свежей тканью или параформальдегидом фиксированной тканью мозга мыши. Надев защитные очки, используйте лезвие бритвы, чтобы разделить два стекла камеры гелеобразования. Обрежьте пустой гель вокруг ткани, чтобы свести к минимуму объем, и убедитесь, что разрезаете асимметрично, чтобы отслеживать ориентацию геля после гомогенизации.

Аккуратно поднимите салфетку, содержащую гель, со предметного стекла лезвием бритвы. Переложите его в двухмиллилитровую центрифужную пробирку. Заполните пробирку доверху гомогенизационным буфером, предварительно нагретым до 80 градусов Цельсия.

Затем инкубируйте образец при встряхивании при температуре 80 градусов Цельсия в течение восьми-60 часов. Вылейте содержимое центрифужной пробирки в одну лунку из шестилуночного пластикового планшета для культивирования клеток и удалите буфер для денатурации с помощью передаточной пипетки. Чтобы полностью удалить остатки SDS из гидрогеля, промойте образец в 1% растворе неионогенного поверхностно-активного вещества.

Наконец, храните образец в PBS и 0,02% азиде натрия при четырех градусах Цельсия.