Для начала подготовьте эксперимент и материалы, необходимые для установки и позиционирования рыбок данио. Под стереомикроскопом понаблюдайте за парализованной личинкой данио-рерио, чтобы убедиться, что ее движение остановилось. Оцените здоровье личинки визуально, проверив ее сердцебиение.
Затем с помощью переводной пипетки поместите одну личинку данио-рерио в 1,5-миллилитровую микроцентрифужную пробирку, содержащую агарозный гель. Налейте агарозный гель в чашку Петри, чтобы получился слой в один-два миллиметра. Перенесите личинку из микроцентрифужной пробирки в чашку Петри с помощью переводной пипетки.
Обязательно поместите личинку в центр блюда. С помощью щипцов расположите личинку в нужной ориентации так, чтобы голова и хвост были плоскими. Затем с помощью щипцов поверните личинку, чтобы выровнять оба глаза.
После завершения выравнивания подождите, пока агарозный гель застынет, прежде чем наполнять чашку Петри яичной водой. Поместите чашку со встроенной личинкой на предметный столик микроскопа для получения изображения. Включите микроскоп и расположите личинку в центре поля зрения.
С помощью программного обеспечения для получения изображений задайте параметры изображения. Если изображение насыщенное, уменьшите мощность лазера. Далее найдите мозг личинки, перемещая ступень, и определите его толщину с помощью режима Live View в программном обеспечении, меняя фокальные плоскости вручную вверх и вниз.
Установите нижнюю и верхнюю границы объема. Затем перейдите к получению изображения для заданного поля зрения. Для объемной структурной визуализации получите 3D-изображение всего мозга путем последовательного получения 2D-изображений каждой Z-плоскости.
Для функциональной визуализации одной Z-плоскости получите временные ряды изображений нейронной активности мозга на определенной глубине.
