Создание ДНК-зондов для мечения половых хромосом комаров Anopheles и приготовление гибридизационного раствора

Начните с использования коммерческого набора для экстракции для извлечения геномной ДНК из куколок или взрослых самцов комаров Anopheles. Далее приготовьте реакционную смесь для ПЦР. Пометьте 18 SR-ДНК и сателлит AGY 53B, выполнив реакцию ПЦР.

Для приготовления гибридизационного раствора добавьте в пробирку объемом 1,5 миллилитра пять микролитров меченого ДНК-зонда. Затем добавьте пять микролитров ДНК спермы лосося. Осадите зонд ДНК путем добавления двух объемов 100% этанола и 0,1 объема трех моляров ацетата натрия.

Держать при температуре минус 20 градусов по Цельсию не менее 2,5 часов. Центрифугируйте пробирку при 17 000 G в течение 20 минут при четырех градусах Цельсия. Затем удалите этанол и высушите гранулы на воздухе при комнатной температуре в темноте в течение 20 минут.

Далее приготовьте гибридизационный буфер в пробирке объемом 1,5 миллилитров. Смешайте раствор на вихре в течение одной минуты и дайте сульфату декстрана раствориться при температуре 37 градусов Цельсия в течение 30 минут. Чтобы получить гибридизационный раствор, растворите палитру ДНК в 20-30 микролитрах буфера для гибридизации.

Перебейте раствор вихрем в течение одной минуты. Выполните быстрый отжим и храните пробирки при температуре 37 градусов Цельсия в темноте.