Получение кардиомиоцитов и настройка аппарата для медленного метода инъекции

Приготовьте 10%-ный желатиновый исходный раствор путем взвешивания и растворения желатина в буфере ADS и автоклавирования раствора. Нагрейте 10%-ный желатиновый бульон при температуре 37 градусов Цельсия, пока он не станет жидким. Затем разбавьте желатиновый бульон, используя предварительно подогретый буфер ADS, чтобы получить окончательный инъекционный 5%-ный раствор желатина.

Суспензируйте 96 кардиомиоцитарных шариков в 100 микролитрах подогретого раствора для инъекций. Загрузите суспензию кардиомиоцитарного шарика в клеточный инъекционный шприц, не отсасывая лишний воздух. Затем держите шприц вертикально, иглой вверх, и постучите по шприцу, чтобы собрать пузырьки на верхнем гребне шприца.

Также понаблюдайте за тем, как кардиомиоцитарные шарики постепенно оседают на резиновом уплотнителе поршня. Сохраняйте вертикальное положение шприца и медленно нажимайте на поршень, чтобы сбросить пузырьки и лишний раствор клеточной суспензии, пока в шприце не останется 20 микролитров клеточной суспензии, а кардиомиоцитарный шарик не останется лежащим на резиновом уплотнителе поршня. После этого погрузите шприц с крышкой в ледяную ванну на пять минут и зафиксируйте аппарат для инъекционного шприца на животном этапе перед активацией основного шприцевого насоса во время чрескожной трансплантации клеток у крысы под наркозом.