Динамическое наблюдение за слиянием липидных капель (ЛД) в клетках гепатоцитов крупного рогатого скота

Для начала необходимо получить 80% выращенных клеток гепатоцитов крупного рогатого скота и заменить питательную среду на DMEM, содержащую линолевую кислоту. Инкубируйте клетки при температуре 37 градусов Цельсия в 5% углекислом газе в течение 24 часов, чтобы накопить LD. Затем удалите питательную среду и промойте адгезионные клетки PBS.

Добавьте в клетки нейтральный флуоресцентный зонд BODIPY и инкубируйте в темноте в течение 30 минут. После трех стирок PBS добавьте в клетки DMEM, содержащий линолевую кислоту. Поместите чашку для культуры в паз микроскопа живой клеточной станции и включите микроскоп и компьютер.

Запустите программное обеспечение NIS-Elements. Найдите поле зрения при 4-кратном увеличении. Затем отрегулируйте его на 40x, включите PFS, выполните повторную фокусировку и выберите соответствующее поле зрения.

Для тестового прогона установите подходящее время и каналы. Затем нажмите Run Now, чтобы снять образцы в течение одной минуты. Для эксперимента на вкладке Время установите интервал времени в пять минут и продолжительность съемки в шесть часов, установите флуоресцентный и светлопольный каналы и нажмите Run now, чтобы снять сэмплы.

Затем выберите «Файл», а затем «Сохранить как» и «Формат файла изображения AVI», чтобы экспортировать данные в видео в формате AVI. Большие ЛД образовывались в результате слияния маленьких ЛД. В первые 15 минут были меньшие ЛД.

Через 20 минут они начали сливаться, а к 35 минуте полностью превратились в более крупную СПД.