Установка мыши на вставку Live Imaging для прижизненной визуализации

Прежде чем поместить мышь под наркозом на вставку для визуализации в реальном времени, установленную на инвертированном предметном столике микроскопа, проденьте изофлурановую трубку с прикрепленным носовым конусом через угловой кронштейн трубки на вкладыше. После подключения нагревательной пластины к контроллеру, содержащему прикрепленный щуп анального термометра, и его включения, перенесите мышь, находящуюся под наркозом, из индукционной камеры на нагревательную пластину. Затем закрепите носовой конус на мыши.

Вставьте анальный зонд в животное и отрегулируйте контроллер так, чтобы поддерживать стабильную температуру тела около 36 градусов по Цельсию. Накройте правильно расположенную мышь полиэтиленовой пищевой пленкой, чтобы удерживать тепло тела и повышать температуру тела. Расположите мышь так, чтобы ее головка совпала с диском защитного стекла, и прикрепите ее ухо к центру стеклянной крышки с помощью металлического ушного зажима или ленты.

После завершения визуализации выберите опцию «Низкий поток» на электронном испарителе, чтобы прекратить доставку изофлурана. Переложите мышь на грелку, пока она не станет передвижной. Сняв защитный диск, протрите его бумагой для линз и раствором для линз.

Храните его надлежащим образом, чтобы избежать царапин при повторном использовании. Далее отсоедините анестезиологическую трубку от кронштейна вкладыша и открутите вкладыш от предметного столика микроскопа. Приобретенные Z-стеки флуоресцентно помеченной ткани уха живой мыши показали минимальный дрейф по осям x, y и z с течением времени, что подтверждает возможность использования специально напечатанных на 3D-принтере вставок для визуализации в реальном времени.

Временные точки из трехчасового покадрового фильма эпидермальных клеток уха мыши mCherry взрослого самца мыши показали, что одна плоскость z остается в фокусе в течение длительного времени. Аналогичные наблюдения были сделаны из другого трехчасового фильма о GFP-положительных фибробластах ушной кожи взрослой самки мыши.