Начните забор донорского сердца новорожденного с анестезии и стерилизации крысы, а также сделайте горизонтальный разрез на мечевидной кости с помощью скальпеля с 15 лезвиями под хирургическим микроскопом с 12,5-кратным увеличением. Затем с помощью ножниц сделайте вертикальные разрезы сбоку до подмышечных впадин, с обеих сторон. Удалите переднюю грудную стенку с еще одним горизонтальным разрезом под шеей.
Рассеките ножницами нижнюю полую вену, или IVC, правую и левую верхнюю полые вены, или SVC, и легочные сосуды. Обведите и переложите тусклые сосуды с помощью шелкового шва 7-0. Слегка надавите на диафрагму с помощью щипцов и введите три миллилитра ледяного модифицированного раствора Кребса-Хенселеита с высоким содержанием калия в правое предсердие, проколов НПВ иглой 30-го калибра.
Разрежьте ножницами НПВ, ВПК и легочные сосуды. Обеспечьте надлежащую длину, пересекая легочные артерии как можно дальше, а также аорту, дистальнее брахиоцефального ствола, используя скальпель с 11 лезвиями. Промойте сердце ледяным кардиоплегическим раствором с помощью трехмиллилитрового шприца.
Поместите крысу под наркозом на косую полку. Закрепите его передние зубы веревкой, а головку расположите по направлению к хирургу. Поместите фонарь с внешней стороны шеи на область голосовых связок.
Возьмитесь за язык двумя пальцами и осторожно протолкните его вверх и влево для оптимальной видимости при интубации. Теперь используйте двухдюймовую канюлю 18-го калибра для крысы весом от 100 до 150 граммов и закрепите внутритрахеальную трубку лентой. Подключите интубационную канюлю к аппарату искусственной вентиляции легких для мелких животных и отрегулируйте настройки в зависимости от размера животного, следуя инструкциям производителя.
После интубации крысы проведите лапаротомию по средней линии с использованием скальпеля с 15 лезвиями, чтобы сделать разрез кожи. Вскройте ножницами переднюю брюшную стенку и мобилизуйте кишечник по направлению к правому верхнему квадранту. Затем обнажите забрюшинную брюшную аорту и НПВ, используя аппликаторы с ватным наконечником.
Накройте кишечник теплой, пропитанной солевым раствором марлей и используйте ретракторы для поддержания оптимального воздействия НПВ и брюшной аорты. Теперь выполните тупое рассечение инфраренального НПВ и брюшной аорты до бифуркации. Лигат тусклых инфраренальных ветвящихся артерий и вен с нейлоновым швом 10-0.
Транспортируйте собранное сердце донора в стерильном операционном бассейне, содержащем буфер Кребса-Хенеселейта, в операционное поле. Обязательно периодически орошайте донорское сердце ледяным кардиоплегическим раствором. Далее отделите легочный ствол и нисходящую аорту с помощью микроножниц, а донорское сердце орошите ледяным кардиоплегическим раствором.
Далее наложите четыре атравматичных сосудистых зажима на дистальный и проксимальный сегменты инфраренальной аорты и НПВ. Выполните аортотомию с помощью микроножниц, чтобы сделать два небольших горизонтальных разреза. Затем поместите донорское сердце на левую сторону аорты.
Закрепите инфраренальную аорту реципиента и восходящую аорту донора и боковые стороны аортотомии на 12 и 6 часов. Приступайте к наложению третьего и четвертого швов в положении «три часа» и «девять часов», аккуратно переворачивая сердце в левую сторону аорты после наложения третьего шва. Завершите артериальный анастомоз, добавив от одного до двух швов в каждую промежуток.
Теперь поверните крысу против часовой стрелки так, чтобы голова была обращена к левой руке хирурга. Сместите сердце донора в левую сторону брюшной аорты для оптимального обзора НПВ. Выполните венотомию на НПВ, расположенном немного проксимальнее аортального анастомоза.
С помощью 11 лезвий для прокола и микроножниц отрегулировать размер в соответствии с диаметром легочного ствола донора, промыть внутриковальный просвет гепаринизированным физиологическим раствором. Затем выполните венозный анастомоз между НПВ реципиента и легочным стволом донора, наложив прерывистые нейлоновые швы 11-0 на заднюю стенку сосуда, начиная с положений «12 часов» и «шесть часов». Наложите непрерывный нейлоновый шов 11-0 на переднюю стенку, наложите на анастомозы рассасывающиеся полоски желатиновой губки и снимите микрососудистые зажимы, начиная с дистальных.
Убедитесь, что коронарные сосуды заполнены и что сердце донора начинает биться вскоре после снятия проксимальных зажимов. Слегка надавите на губки с помощью аппликатора с ватным наконечником для достижения оптимального гемостаза. Осторожно поместите кишечник обратно в брюшную полость, стараясь не деформировать артериальный и венозный анастомоз.
Закройте брюшную стенку и дайте животному восстановиться. Показан горизонтальный срез донорского трансплантата, резецированный на среднежелудочковом уровне правого и левого желудочков. Гистологический анализ показал, что ткань эндокардиального фиброэластоза имела большое количество организованных коллагеновых и эластиновых волокон.
Ткань эндокардиального фиброэластоза, дважды окрашенная на VE-кадгерин и альфа-СМА. CD-31, фосфо-SMAD2 и SMAD3, CD-31, а также слизни или улитки указывали на эндотелиально-мезенхимальный переход.
