Лечение моноцитарных дендритных клеток (Mo-DCs) сиалидазой

Соберите примерно 10 раз по 10 до шестого дендритных клеток, полученных из моноцитов человека, дифференцированных из моноцитов. Из 10 лунок из 24-луночного планшета, имеющего 1,3 умножить на 10 до шестых клеток на лунку, переложить их в новую стерильную 15-миллилитровую коническую трубку. После центрифугирования клеток при 300G в течение пяти-семи минут при комнатной температуре, используя обычный перерыв, выбросьте надосадочную жидкость для удаления мертвых клеток и мусора.

Добавьте в пробирку 10 миллилитров среды RPMI 1640, содержащей 11,1 миллимолярной глюкозы. После центрифугирования при комнатной температуре в течение четырех минут при 300G, используя обычный перерыв, снова выбросьте надосадочную жидкость. Добавьте два миллилитра среды RPMI 1640 в клеточную гранулу и разделите один миллилитр клеточной суспензии на две новые стерильные микропробирки, помеченные как номер один и номер два.

В первую микропробирку добавьте 500 миллиединиц сиалидазы из Clostridium perfringens. Инкубируйте обе пробирки в течение 60 минут при температуре 37 градусов Цельсия. После инкубации перенесите клетки из обеих микротрубок в соответствующие новые 15-миллилитровые конические пробирки, помеченные как номер один и номер два.

Затем добавьте примерно четыре миллилитра полной среды RPMI 1640, содержащей 10% FBS, в каждую коническую пробирку. Центрифугируйте пробирки при комнатной температуре в течение четырех минут при 300G, используя обычный разрыв, и добавьте пять миллилитров полной среды RPMI 1640 в гранулу. Пластина по одному миллилиру клеток на лунку.

Эффективность лечения сайлидазой для снижения содержания сиаловой кислоты на поверхности дендритных клеток, полученных из моноцитов человека, оценивали с помощью проточной цитометрии и конфокальной микроскопии. Лечение сайлидазой значительно снижало связывание лектина Maackia amurensis и Sambucus nigra lectin при одновременном увеличении окрашивания агглютинина арахиса. Снижение окрашивания лектина Sambucus nigra после лечения Сайлидазой показало значительное снижение окрашивания лектина Sambucus nigra на поверхности клетки.