Начните со сбора семян дикой сои, S.Americanum, и местного сорта тыквы. Посейте семена в вермикулит на глубину до одного сантиметра и тщательно полейте их. Выращивайте их в камере роста при относительной влажности воздуха около 70%.
Достаньте штамм A.rhizogenes K599 из морозильной камеры при температуре 80 градусов Цельсия и активируйте его на твердой среде LB при температуре 28 градусов Цельсия на 48 часов. Затем отбирают один клон штамма К599 и культивируют его в одном миллилитре жидкой антибиотиковой среды, содержащей LB, в течение 12 часов. Равномерно распределите 500 микролитров бактериальной суспензии по твердому антибиотику, содержащему LB-среду, и инкубируйте при температуре 28 градусов Цельсия в течение 24 часов.
Через семь дней, когда семядоли развернуты, с помощью стерилизованного острого скальпеля срежьте примерно от 0,5 до одного сантиметра гипокотиля. Выбросьте первичный корень и часть гипокотила. Покройте разрез гипокотиля бактериями K599.
Посадите рассаду во влажный вермикулит и заразите 30 растений каждого вида, используя преобразование волосистых корней с помощью A.rhizogenes. Затем полейте растения пятью миллилитрами ресуспендированной бактериальной суспензии K599 в базовой среде Gamborg B5 четвертой концентрации. Накройте горшки прозрачным полиэтиленовым пакетом и поместите их в камеру роста.
Выращивайте растения в течение примерно 12 дней после прививки. В это время в месте разреза должны быть образованы новые волосатые корни, обычно достигающие длины от двух до пяти сантиметров. Используя люминесцентную систему визуализации CAMI с зеленым возбуждающим светом на 540 нанометрах и излучением на 600 нанометрах, можно определить экспрессию репортерного гена DsRed2.
Визуализированы корни составных растений дикой сои, S.Americanum и тыквы под естественным и зеленым возбуждающим светом.
