После обезболивания мыши осторожно ущипните одну из лап мыши, чтобы проверить, достаточно ли обезболивает мышь. Введите 1%-ный офтальмологический раствор тропикамида для расширения глаз мыши и подождите 30 секунд. Затем, чтобы уменьшить движение глаз и моргание, нанесите капли 0,5% пропаракаина гидрохлорида на оба глаза, а затем капли лубрикающего глазного геля и положите мышь на нагревательную водяную подушку.
Приготовьте смесь красителей, содержащую равный объем индоцианина зеленого, или ICG, и флуоресцеиновый краситель. Введите 250 микролитров смеси через внутрибрюшинную инъекцию в нижний левый квадрант возле задних лап мыши, расположив его параллельно коже, чтобы предотвратить перфорацию органа. Осторожно втяните поршень, убедившись, что кровь не попала в колпачок шприца.
Продолжайте, постепенно вводя краситель в постоянном темпе. Далее поместите мышь на грелку платформы для формирования изображений. Отрегулируйте положение корпуса мыши под углом 45 градусов относительно камеры и аккуратно наклоните голову немного вниз.
Аккуратно протрите визуализируемый глаз с помощью ватного тампона, чтобы удалить слой смазки, глазных капель или гелей. Переместите камеру в сторону глаза мыши и выберите канал FA в модуле сбора данных. Расположите голову мыши так, чтобы зрительный нерв был центрирован на экране, избегая необходимости наклонять лазерный сканирующий офтальмоскоп.
Теперь переключитесь на канал ICGA на модуле сбора данных. Как только глаз займет весь экран в программном обеспечении для обработки изображений, поверните круглую черную кнопку на модуле сбора данных для регулировки чувствительности изображения. Используйте ручку офтальмоскопа для точной настройки фокусировки.
Затем нажмите круглую черную кнопку на модуле сбора данных, чтобы нормализовать изображение. После нормализации нажмите кнопку «ПОЛУЧИТЬ» на сенсорной панели, чтобы сохранить изображение. Переключитесь на канал FA с помощью модуля сбора данных и отрегулируйте чувствительность и фокусировку каждого изображения, как показано ранее, чтобы зафиксировать утечку неоваскуляризации хориоидеи или поражение CNV.
Затем сделайте снимки для ранней фазы ИКГ и ФА через три-четыре минуты после инъекции. После того, как все необходимые снимки будут сделаны, нанесите на глаз мыши гелевую смазку или мазь. Капиллярные CNV доминируют в поражениях CNV у молодых мышей.
Напротив, у старых мышей наблюдаются артериолярные ХНВ, характеризующиеся сосудами большого калибра, сосудистыми петлями и анастомотическими соединениями. Как молодые, так и старые мыши демонстрируют четкую видимость сосудистой сети сетчатки на FA.In изображениях ICGA молодых мышей, сосудистая сеть сетчатки не видна, а сосуды хориоидеи выглядят блеклыми. На снимках ICGA старых мышей можно наблюдать частичную сосудистую сеть сетчатки, в то время как сосуды хориоидеи кажутся блеклыми.
Артериолярная ХНВ у старых мышей демонстрирует больший размер ХНВ и значительно большую утечку по сравнению с капиллярной ХНВ у молодых мышей.
