Чтобы подготовить омега-образную перекладину для подголовника данио-рерио, прикрепите к трехосному микроманипулятору кусочек пластилина на масляной основе. Затем вставьте в глину кронштейн для перекладины и сверните перекладину для головы горизонтально. Подготовьте пушку для удержания тела рыбы на месте во время операции.
Чтобы удалить лишнюю кожу и воду с мест прикрепления черепа, приготовьте четыре тампона из ткани, разрезав бумажное полотенце на квадрат в три сантиметра. Затем сложите бумажные квадраты по диагонали, чтобы получилась трубчатая структура, и скрутите концы трубки в тонкое острие. После обезболивания рыб 0,03% ТМС выполните перфузию шприца с 0,01% ТМС для поддержания седативного эффекта на протяжении всей процедуры.
Заверните рыбу во влажную бумажную ткань, начиная от кончика хвоста и заканчивая примерно одним миллиметром каудально до жабры. Затем оберните мягкую пластиковую трубку с продольной щелью вокруг бумажной ткани, охватывающей рыбу от конца хвоста примерно до двух миллиметров каудально до жабры. Оберните трубку бумажным полотенцем.
Затем оберните вокруг бумажного полотенца мягкую пластиковую трубочку, вырезанную из колбы пластиковой трансферной пипеткой. Загрузите завернутую рыбу в пушку. Далее с помощью скальпеля удалите кожу, покрывающую места крепления, два треугольных участка черепа ростролатерально к мозжечку и над жабрами.
Затем используйте тампоны для тканей, чтобы высушить места прикрепления и очистить оставшуюся кожу. С помощью наконечника пипетки объемом 10 микролитров нанесите каплю тканевого клея в центр каждого места крепления. Поместите тело рыбы в вертикальное положение и расположите перекладину для головы немного выше и каудально к местам крепления.
Далее приготовьте стоматологический цемент, смешав одну маленькую ложку полимера с четырьмя каплями быстрого мономера и одной каплей катализатора пятью. Равномерно перемешивайте смесь в течение 15 секунд. Сразу после смешивания с помощью микропипетки и наконечника пипетки объемом 10 микролитров нанесите цемент на места крепления и область между ними.
Затем с помощью микроманипулятора аккуратно прижмите напорный брусок к цементу. Залейте верхнюю планку оставшимся цементом и подождите 12 минут, чтобы дать цементу отверститься. Затем, чтобы улучшить оптический доступ к переднему мозгу для визуализации кальция, используйте скальпель для удаления кожи над конечным мозгом.
После затвердевания удалите глину из головного бара. Далее подготовьте модуль загрузки рыбы для микроманипулятора. Затем перенесите всю капсулу из пушки в регулятор шага в модуле загрузки рыбы.
С помощью микроманипулятора расположите рыбу так, чтобы перекладина для головы была размещена поверх металлических стоек головной сцены. Немного увеличьте угол наклона рыбы. Нанесите клей, отверждаемый ультрафиолетом, чтобы закрепить перекладину на металлических стойках.
Затем вытащите рыбу из капсулы и зафиксируйте головную ступень на опорной плите в полушестиугольном аквариуме. После операции погрузите животное в воду аквариума, чтобы восстановиться после анестезии.
