После подготовки мыши к операции определите целевую область, находящуюся в семи миллиметрах слева от грудины и примерно в семи миллиметрах над подреберным краем. Приподнимите кожу над выявленной областью с помощью щипцов и сделайте круговой разрез 10 миллиметров с помощью острых микрорассекающих ножниц, чтобы разрезать только кожу. Затем удалите мягкие ткани над грудной клеткой и прижгите любые крупные кровеносные сосуды на обоих концах с помощью ручки для прижигания.
Поднимите шестое или седьмое ребро с помощью щипцов и используйте одно лезвие тупых микроножниц, чтобы проколоть межреберную мышцу. Теперь аккуратно поверните ножницы и сделайте примерно 10-миллиметровый разрез в межреберье, избегая при этом контакта с легочной тканью и ребрами. Осторожно выпустите сжатый воздух на запястье или руке, чтобы определить подходящую силу потока и очистить сопло от мусора.
Затем нанесите короткие порции воздуха на разрез, чтобы не вызвать повреждение легких. С помощью щипцов поднимите шестое или седьмое ребро и вставьте ретрактор в межреберный разрез лезвиями, параллельными грудной стенке. Затем осторожно отпустите ручку, чтобы позволить втягивающему устройству открыться и постепенно раскрывать легкое.
Теперь нанесите две-три капли стерильного PBS, нагретого до 37 градусов, на подогретую до 37 градусов легочную ткань, чтобы предотвратить ее высыхание. Наложите на мышь кусок алюминиевой фольги с небольшим вырезом, расположив его непосредственно над обнаженной легочной тканью. Убедитесь, что на вырезе видна только открытая грудная клетка и близлежащие ткани для целенаправленного преобразования фотографий легких.
Затем расположите рамку с вырезом над мышью и алюминиевой фольгой, следя за тем, чтобы вырез совпал с открытым легким. И установите лампу преобразования фотографий прямо над вырезом на коробке. Затем активируйте лампу преобразования фотографий, чтобы освещать обнаженную легочную ткань в течение непрерывного периода в течение шести минут.
После преобразования фотографий выключите лампу и очистите фонарный короб и маску из алюминиевой фольги от мыши. Отделите легкое от грудной стенки, выпустив воздух в запястье, а затем выпустите воздух в разрезе грудной клетки. Крепко возьмитесь за рукоятку втягивающего устройства и сожмите ее, чтобы закрыть лезвия.
Осторожно выведите закрытый ретрактор из межреберья, следя за тем, чтобы он не соприкасался с легочной тканью. Затем используйте шелковый шов 5-0, чтобы закрыть межреберный разрез простым непрерывным рисунком шва, гарантируя, что ребро с обеих сторон разреза включено. Плотно натяните шов, чтобы края раны выровнялись, восстанавливая целостность грудной стенки.
Закрепите шов, завязав конец четыре раза. Обрежьте хвосты швов как можно ближе к узлу, а кожу закройте с помощью хирургических скоб. Чтобы удалить лишний воздух из грудной полости, введите одномиллилитровый шприц с иглой 28 калибра ниже мечевидного отростка.
Наберите шприц обратно примерно на один миллилитр. Извлеките шприц из мыши и выпустите воздух. Показаны изображения подвергшихся воздействию Dendra2, экспрессирующих метастазы в легких до воздействия синего света.
Воздействие Dendra2, экспрессирующего метастазы в легких, на синий свет показало, что шестиминутное воздействие дало самый яркий сигнал в фотопреобразованном канале как в образцах ex vivo, так и in vivo. Фотоконвертированные и нефотоконвертированные клетки были идентифицированы во всех трех типах тканей мышей, перенесших операцию с воздействием синего света. В тканях мышей, перенесших операцию без воздействия синего света, были обнаружены только нефотопреобразованные опухолевые клетки.
