Начните с подготовки биопсийного перфоратора диаметром 3,5 миллиметра. Отметьте точку на валу пуансона в пяти миллиметрах дистальнее края. Закрепите пуансон и с помощью двухскоростного вращающегося инструмента разрежьте отмеченный дистальный участок вала.
Срежьте стержень на глубине 3,5 миллиметра, оставив последние 1,5 миллиметра прикрепленными, и загните кончик под углом 90 градусов. Далее приготовьте PBS в 900 миллилитрах дистиллированной воды и отрегулируйте pH до 7,4. Затем доведите раствор до конечного объема в один литр, добавив дистиллированную воду.
Приготовьте 4%-ный раствор параформного альдегида, растворив два грамма параформного альдегида в 45 миллилитрах PBS под химическим колпаком, и нагрейте его до 65 градусов Цельсия, регулируя pH до 7,4. Как только параформный альдегид полностью растворится, отрегулируйте итоговый объем раствора до 50 миллилитров. Взвесьте мышь, чтобы определить правильный объем инъекционного анестетического коктейля для введения.
После введения анестезии поместите мышь на операционный стол, придерживаясь стандартных принципов хирургии грызунов. Затем подложите под голову грызуна подушку высотой пять миллиметров в положении бокового пролежня. Тщательно высушите поверхность глаза хирургическим глазным копьем и аккуратно подстригите ресницы.
Отрегулируйте хирургический микроскоп для оптимального обзора мыши под наркозом и установите таймер на 30 секунд. Затем исследуйте окружность лимбальной области с помощью хирургического микроскопа, держа веки мыши широко открытыми, используя большой и указательный пальцы. Теперь осторожно держите стерилизованный пунш трепаном параллельно оси глаз, не прикладывая давления вниз.
Избегайте вращения инструмента и держите ось трепанина перфоратора параллельно оси земного шара. Попросите ассистента хирурга поместить три капли раствора гидроксида натрия в отверстие для перфоратора. Через 30 секунд очистите роговицу и свод, используя пять миллилитров PBS.
Затем используйте универсальную бумагу для индикатора pH, чтобы обеспечить значение pH от 7 до 7,5 на поверхности роговицы поврежденного глаза. После процедуры вымыть, высушить и продезинфицировать пунш трепан и операционный стол с 70% этанолом. Рассмотрите глаза мыши, находящейся под наркозом, под биомикроскопом щелевой лампы и используйте камеру для съемки изображений.
Затем нанесите 0,1% флуоресцентные глазные капли и пропитайте излишки флуоресцентной жидкости ватным аппликатором. Оцените возможное наличие эпителиальных дефектов роговицы с помощью кобальтового синего фильтра и сделайте фотографии. После этого нанесите на поврежденную поверхность глаза офтальмологическую мазь с тройным антибиотиком.
Зародыш глаза с сохранением медиального карункула и всей пальпируемой конъюнктивы. Под хирургическим микроскопом деликатно рассекут место соединения между карункулом и кожей. С помощью зубных щипцов втяните карункул и помогите направить хирургические ножницы под пальпируемую конъюнктиву, направляясь к ее соединению с тарзальной пластинкой.
Разрежьте конъюнктиву по линии сцепления в сторону бокового кантуса. Затем поверните хирургические ножницы к месту соединения конъюнктивы и нижней тарзальной пластинки в субконъюнктивальной плоскости. Теперь втяните верхнее и нижнее веко с носовой стороны с помощью большого и указательного пальцев.
Отводя, направьте кончик пинцета с изогнутым концом за выступающую слезную железу, двигаясь к зрительному нерву. Крепко возьмитесь за зрительный нерв и извлеките глазный яблоко. Позже промойте шар PBS и перенесите его в раствор для фиксации.
Показан процесс заживления раны мышиного глаза после повреждения роговицы и лимбальной щелочи на мышиной модели. Отек роговицы заметен на нулевой и второй день, тогда как фиброз более заметен на второй неделе после травмы. Эпителиальный дефект заживает путем миграции эпителиальных клеток конъюнктивы по центростремительному типу в течение 12-14 дней.
Тем не менее, у 50% поврежденных глаз развились стойкие эпителиальные дефекты в конце второй недели.
