Начните с того, что положите мышь под наркозом на правый бок на нагретую хирургическую стойку, чтобы обнажить ее левое брюшное поло. Закрепите переднюю часть и задние конечности мыши бумажной лентой, обеспечивая видимость селезенки. Далее продезинфицируйте кожу в месте операции, обильно нанеся антисептик.
Убедитесь, что мышь полностью обезболивалась, ущипнув палец ноги. С помощью щипцов подтяните кожу верхней левой части живота и сделайте 10-миллиметровый круговой разрез в коже и мышечном слое с помощью ножниц кастровьехо. Найдите поджелудочную железу, прикрепленную к селезенке, чтобы определить, в каком направлении следует располагать вышивку крестом.
С помощью шелкового шва 5/0 наложите первый стежок мышечного слоя в указанном месте. Закрепите конец с помощью трех-пяти узлов. Продолжайте прошивать непосредственно через разрез.
Затем отрежьте и оставьте хвостик примерно в пять сантиметров. Повторите строчку, на этот раз перпендикулярно первоначальному стежку. Далее осторожно приподнимите и расположите поджелудочную железу над вышивкой крестом.
Расположите стежок из кисетного шнурка примерно в одном миллиметре от отверстия, переплетая кожу и мышечный слой. Расположите оконную раму так, чтобы края круглого разреза располагались внутри оконного паза. Теперь закрепите имплантированное окно, плотно завязав шелк 5/0.
Загрузите 100 микролитров жидкого цианоакрилатного клея в 10-миллиметровый шприц. Подайте нежную струю сжатого воздуха к ткани примерно на 10 секунд, чтобы высушить ее. С помощью щипцов обхватите оконную раму за ее внешний край и осторожно приподнимите, чтобы обеспечить отделение поджелудочной железы от основания оконной рамы.
Нанесите тонкий слой жидкого цианоакрилатного клея вдоль углубления окна, избегая ткани поджелудочной железы. Затем с помощью вакуумных датчиков поднимите пятимиллиметровую крышку. Аккуратно расположите защитный колпачок в центре оптической оконной рамы и сохраняйте легкое давление в течение примерно 25 секунд, чтобы клей схватился.
С помощью щипцов отсоедините чехол от вакуумных датчиков. Далее затяните крестиком швы, чтобы закрепить поджелудочную железу на покровном слипе и разрежьте концы швов. Наконец, снимите скотч с мыши.
Выключите испаритель изофлурана и переместите мышь в чистую клетку. После периода оседания наблюдалась повышенная латеральная и осевая стабильность ткани поджелудочной железы. Визуализация с помощью SWIP показала более низкие уровни дрейфа по сравнению с окнами визуализации брюшной полости и поджелудочной железы.
Серийная визуализация поджелудочной железы мышей проводилась после лечения церулином. Перемещение долек наблюдалось через два дня подряд. SWIP также можно использовать для долгосрочной визуализации, что позволяет визуализировать и количественно оценить моторику вакуоли.
Например, средняя скорость вакуолей в поджелудочной железе мышей увеличилась примерно на 10% после лечения церулином по сравнению с PBS. Лечение церулеином также увеличило среднюю частоту поворота субклеточных структур на 10%Однако не было существенной разницы в чистой скорости, направленности или кумулятивном расстоянии между процедурами. SWIP позволяет визуализировать и захватывать миграцию опухолевых клеток.
Коллективная кластерная миграция опухолевых клеток наблюдалась в течение коротких временных промежутков времени. Также наблюдалась миграция опухолевых клеток и макрофагов в одиночные клетки.
