Начните с настройки автоматизированного рабочего места. Включите устройство подсветки микропластин, такое как optoPlate, которое обеспечивает удобный доступ к манипулятору робота. Далее обработайте электронную таблицу с помощью имеющегося скрипта MATLAB для программирования оптоПластины.
Выполните программу стимуляции света, мигнув на оптопластине. Чтобы запрограммировать робота, устраните любые потенциальные ошибки, чтобы обеспечить надлежащее функционирование носителя и определений LabWare. Пропустите пустую пластину через цикл скрипта несколько раз, чтобы убедиться в способности манипулятора робота точно захватывать и размещать пластину.
Затем выберите колонии из пластин, чтобы настроить пластину для образца. Затем инокулируйте их в три миллилитра синтетической готовой среды в стеклянные пробирки для культивирования. Инкубируйте эти культуры в течение ночи при температуре 30 градусов Цельсия на роликовом барабане в темноте.
В кювете разведите 200 микролитров культуры в одном миллилитре синтетической готовой среды. Запишите его оптическую плотность с помощью спектрофотометра. Затем разбавляют каждую ночную культуру до оптической плотности 0,1 в стеклянных пробирках для культивирования.
Разведенные культуры пипеткой выложите в 96-луночный планшет. В качестве отрицательного контроля включайте лунки с пустыми средами и нефлуоресцентными элементами. Инкубируйте планшет с образцом в шейкер-инкубаторе при температуре 30 градусов Цельсия в течение пяти часов.
Теперь поместите пластину с образцом на шейкер обогревателя. Запустите скрипт автоматизации, нажав кнопку «Выполнить». После того, как исходное измерение будет записано на считывателе пластин, запустите программу стимуляции света, включив удлинитель осветительного устройства.
Значения флуоресценции с течением времени для оптогенетического штамма показали, что общий уровень флуоресценции был пропорционален скважности световой стимуляции. Соответствующие значения оптической плотности были постоянными, что позволяет предположить, что на рост не влияли различные условия освещения. Различные оптогенетические штаммы по-разному реагировали на интенсивность, период и изменения рабочего цикла светового импульса.
