Начните с поддержания содержания мух при температуре 25 градусов по Цельсию, в узких флаконах, наполненных стандартной пищей дрозофил. Включите водяную баню и отрегулируйте температуру по мере необходимости. С помощью лабораторной салфетки, сбрызгенной 70% этанолом, очистите швы матового стекла камер и заглушек датчиков, а затем используйте свежую салфетку, чтобы удалить остатки этанола.
Далее поместите на дно камеры сантиметровый кусок ватного валика, смоченный в очищенной воде, чтобы создать стабильную влажностную среду. Добавьте достаточное количество воды, чтобы образовалась скромная лужа у основания ватного валика. Убедитесь, что стык камеры сухой, протерев пролитую воду.
Аккуратно переложите мух в промаркированные полипропиленовые трубки с помощью воронки, а трубки закупорьте ватным валиком. Теперь добавьте вентилируемую трубку с мухами в каждую камеру респирометра. Наполните картриджи с натронной известью и расположите их в верхней части трубки, содержащей мух внутри камеры.
Затем заполните кислородные генераторы насыщенным раствором медного купороса, следя за тем, чтобы уровень оставался ниже вентиляционных отверстий. Подключите заправленный генератор кислорода к двухконтактному разъему, расположенному на штекере датчика. Нанесите два небольших капля прозрачной силиконовой смазки на противоположные стороны шва шлифованного стекла вилки датчика.
Вставьте заглушку в камеру и аккуратно вращайте ее с умеренным давлением, чтобы равномерно распределить смазку внутри соединения. Сотрите излишки жира с помощью лабораторной салфетки. Затем закрепите заглушки камеры, защелкнув пластиковые зажимы кека.
Поместите собранные камеры в решетку на водяной бане, убедившись, что запорные краны открыты. Удерживайте запорные краны в открытом положении и дайте камерам уравновеситься в течение примерно 30 минут. Убедитесь, что выключатели, подающие ток на кислородные генераторы, выключены.
Подключите контроллеры к камерам респирометра с помощью шести проводящих кабелей и убедитесь, что органические светодиоды, отображаемые на контроллерах, активно отображают параметры окружающей среды. Теперь активируйте генераторы кислорода с помощью переключателя на контроллере. Как только значение тока повышается с нуля до 35-55 миллиампер, контроллер и камера готовы к экспериментам.
После выключения генераторов кислорода определите коммуникационные порты, которые используют контроллеры. Откройте программное обеспечение PuTTY на рабочем столе и настройте файл журнала для каждого канала репульсометра, выбрав порт связи для контроллера и введя номер этого порта в поле последовательной линии. Затем нажмите «Ведение журнала».
Выберите выходные данные участника в протоколе сеанса и под именем файла журнала нажмите кнопку Обзор. В выбранной папке создайте имя файла, содержащее описательную информацию. Затем нажмите «Сохранить».
Нажмите «Открыть», и откроется окно, показывающее общие данные с разделителями, которые регистрируются. Повторите этот процесс для всех других используемых контроллеров. Каждый входной сигнал коммуникационного порта будет отображаться в отдельном окне.
После уравновешивания камер в течение 30 минут загерметизируйте их, закрыв запорные краны. Накройте ванну и камеры коробкой из пенополистирола для создания стабильной среды и равновесия в течение часа. Инициировать подачу тока на кислородный генератор каждой камеры можно с помощью переключателя, расположенного на коробке контроллера.
После активации генераторов кислорода убедитесь, что давление увеличивается до заданного давления выключения. После эксперимента выключите генераторы кислорода на всех контроллерах и откройте запорные краны, чтобы открыть камеры. Оставьте окна PuTTY открытыми в течение 5–15 минут, чтобы установить окончательный базовый уровень, а затем завершите запись, закрыв окно PuTTY для каждого контроллера.
Отсоедините датчики от кабелей и транспортируйте камеры на сухую решетку. Одну за другой вынимайте из камер заглушки датчиков. Отсоедините кислородные генераторы и аккуратно поместите их в штатив для трубок.
Затем сотрите смазку с пробки датчика и поместите ее обратно в стойку. Очистите стыки камер от жира и удалите трубки, содержащие мух и известь. Наконец, запишите вес и количество мух для каждой трубки.
Количественные данные о потреблении кислорода мутантными мухами дикого типа и бочковой дельтой 18 показали, что массовое удельное потребление кислорода существенно не различалось среди контрольной группы дикого типа и мутантов бочковой дельты 18. Анализ потребления кислорода в расчете на одну муху показал, что потребление кислорода было значительно снижено в бочке дельта 18 по сравнению с контрольной группой дикого типа. Тем не менее, средняя масса бочонков дельта 18 была ниже, чем у контрольных мух дикого типа.
