Для начала поместите подготовленный срез спинного мозга в камеру записи. Затем поместите анод микроманипуляционной системы рядом с дорсальной средней линией в катоде рядом с зоной входа в дорсальный корешок для правильного позиционирования стимулятора спинного мозга. Теперь переключитесь на объектив с 60-кратным увеличением, чтобы определить здоровый нейрон с гладкой и яркой поверхностью без видимых ядер.
Немного уменьшите интенсивность инфракрасного излучения, включите источник флуоресцентного света и настройте светофильтр на опцию широкополосного ультрафиолетового возбуждения. Теперь выберите подходящий фтор-золотой моторный нейрон и постепенно опускайте электрод, пока он не окажется рядом с нейроном. Когда пипетка соприкоснется с поверхностью, найдите небольшое углубление мембраны на уровне наконечника и сбросьте ранее приложенное положительное давление.
Затем подайте отрицательное давление на пипетку с помощью шприца и подождите, пока значение сопротивления не вырастет до гигаом на программном интерфейсе. Зажимаем мембранный потенциал на отметке минус 70 милливольт. Нажмите кнопку быстрой компенсации емкости в программном интерфейсе усилителя, затем примените кратковременное отрицательное давление для разрыва клеточной мембраны и нажмите кнопку компенсации медленной емкости в программном интерфейсе усилителя.
Применяйте стимуляцию спинного мозга в течение одной-двух секунд, сохраняя амплитуду от одного до 10 миллиампер. Определяйте двигательный порог путем постепенного увеличения амплитуды стимуляции до тех пор, пока не будет замечен первый потенциал действия. Различайте отсроченные и немедленные двигательные нейроны с помощью пятисекундной инжекции деполяризующего тока вокруг реобазы в режиме текущего зажима.
После выключения стимуляции спинного мозга продолжайте записывать мембранные потенциалы, чтобы зафиксировать спонтанное возбуждение потенциалов действия. При повышении амплитуды стимуляции спинного мозга мембранный потенциал увеличивался, а потенциалы действия срабатывали каждые 10-20 импульсов. После того, как стимуляция спинного мозга была отключена, нейрон в течение короткого периода времени запускал ряд потенциалов спонтанного действия.
Затем мембранный потенциал покоя вернулся к отметке минус 65 милливольт.
