Для начала положите на операционный стол мышь-сестер C57 под наркозом от 8 до 10 недель. С помощью тупых щипцов вытащите язык и придерживайте его пальцами. Вставьте ларингоскоп в рот и визуализируйте голосовые связки.
Стабилизируйте подбородок мыши на ларингоскопе и удерживайте внутривенный, или внутривенный катетер 20 калибра со вставленным в него направляющим проводом. Затем слегка вставьте направляющий провод в голосовую связку и медленно протолкните катетер 20 калибра в трахею до тех пор, пока ее крыльевая часть не окажется на одном уровне с кончиком носа. После того как мышь будет подключена к аппарату искусственной вентиляции легких, держите ее в боковом положении правой височной областью вверх.
Поддерживайте ректальную температуру на уровне 37 градусов по Цельсию с помощью грелки и тепловой лампы. После определения местоположения скуловой дуги и разреза височной мышцы используйте два щипца, чтобы рассечь нижележащую скуловую дугу и обнажить сустав между верхней и скуловой костями. Затем с помощью ножниц отрежьте трехмиллиметровый участок скуловой дуги и удалите ее.
Наконец, отделите жевательную мышцу от основания черепа. Расположите четыре небольших ретрактора в разных направлениях и обнажите основание черепа черепа, причем один ретрактор тянет ветви тройничного нерва в сторону. Нанесите каплю физиологического раствора на череп над средней мозговой артерией или стволом MCA и проксимальнее ветви коры головного мозга.
Используйте электрическую болгарку, чтобы истончить череп до тех пор, пока не станет виден небольшой перелом. И кончиком щипцов удалите тонкий череп. Поместите однониточную петлю из черного плетеного шелка поверх MCA.
Затем вставьте 8-O микрохирургической иглой приподнять ствол MCA и завязать шов под иглой, оставив два конца иглы поверх узла петли из шелковой нити. При транзиторной окклюзии средней мозговой артерии (MCAO) слегка затяните узел шелковой нити под иглой, чтобы блокировать артериальный кровоток, представляющий начало MCAO. С помощью щипцов удерживайте шов и медленно извлекайте иглу в конце ишемии.
Лазерная спекл-контрастная визуализация подтвердила снижение кровоснабжения в правой МКА. Для транзиторного MCAO после снятия швов реперфузия мозгового кровотока была очевидна и еще больше улучшилась через 24 часа. Окрашивание головного мозга с помощью ТТС после 24 часов после инсульта продемонстрировало образование инфарктной ткани как в корковой, так и в боковой областях стриатума у молодых и старых мышей.
Размер инфаркта был умеренным по сравнению с филаментом MCAO.
