Дифференцировка IPSC на заднюю примитивную полосу и нефрогенную промежуточную мезодерму

Начните с промывки индуцированных плюрипотентных стволовых клеток или ИПСК на мембранной матричной 6-луночной пластине двумя миллилитрами DPBS. Аспирируйте DPBS с помощью пипетки. Затем добавьте один миллилитр коммерчески доступного раствора для отсоединения ИПСК для отсоединения ИПСК

Затем поместите клетку в инкубатор при температуре 37 градусов на пять минут. Теперь нанесите пипеткой один миллилитр mTeSR на иПСК, убедившись, что клетки отделились от пластиковой поверхности. Центрифугируйте эти клетки при 400г в течение трех минут при комнатной температуре.

Повторно суспендируйте клеточную гранулу, затем подсчитайте количество клеток с помощью гемоцитометра. Затем засейте диапазон плотности клеток на 6-луночной пластине, покрытой мембранной матрицей. Культивируют их с помощью mTeSR с добавлением 10 микромолярного ингибитора ро-киназы.

Культивируйте планшеты на ночь в инкубаторе с углекислым газом, установленном при температуре 37 градусов Цельсия. На следующий день аспирируйте mTeSR и промойте клетки двумя миллилитрами DPBS. Далее добавьте в клетки два миллилитра среды 1 стадии.

Затем поместите клетки в инкубатор с температурой 37 градусов Цельсия на четыре дня. На четвертый день снимите среду 1 стадии и промойте клетки двумя миллилитрами DPBS. Затем добавьте в клетки два миллилитра среды стадии 2 перед инкубацией клеток, как и раньше.

С нуля по четвертый день ИПСК быстро расширялись и приобретали ромбовидную или треугольную форму. Слияние достигало от 90 до 100% и равномерно накапливалось до седьмого дня. При культивировании суспензии агрегаты спонтанно образуют нефронные структуры после диссоциации на седьмой день.