Для начала удалите волосы из прекардиальной области мыши, находящейся под наркозом, с помощью крема для удаления волос и расположите мышь спиной вниз на платформе физиологического мониторинга. Нанесите небольшое количество проводящего геля на медный лист на столе для физиологического мониторинга. Закрепите мышь на паузе на этом геле, чтобы облегчить захват электрокардиограммы и данных дыхания.
Нанесите небольшое количество пропускающего геля для ультразвука, чтобы обеспечить оптимальное качество изображения. Выровняйте платформу в боковом направлении под небольшим углом между зондом и платформой и получите парастернальный вид на сердце по длинной оси. Затем найдите подходящий участок сердца в режиме B.
Активируйте цветной допплер на сенсорном экране и слегка переместите щуп, чтобы найти нужное положение. Теперь переключитесь в режим Pulse Wave, нажав соответствующую кнопку. Расположите желтую линию индикатора на коронарной артерии параллельно направлению потока и нажмите кнопку «Сохранить клип», чтобы задокументировать исходные данные.
Увеличьте концентрацию изофлурана до 3% и подождите 30 секунд. Следите за тем, чтобы скорость потока постепенно увеличивалась со временем. Часто нажимайте кнопку «Сохранить зажим» еще раз, чтобы зафиксировать кровоток с максимальной скоростью.
После завершения эхокардиографической визуализации осторожно извлеките животное из платформы. Используйте инструменты функции пиковой скорости для измерения пиковых диастолических скоростей и оценки систолической функции сердца с помощью полученных изображений. Рассчитайте CFR путем деления диастолической пиковой скорости коронарного кровотока при максимальном потоке на диастолическую пиковую скорость коронарного кровотока на исходном уровне.
Выполнить торакотомию на четвертом межреберье для обнажения сердца. Затем перевязайте артерию ПМЖ с помощью шелкового шва 5-0. Верифицируйте ишемию у мышей с помощью визуального подтверждения визуализации последующего обесцвечивания ишемического миокарда.
Выполните окклюзию артерии ПМЖ в течение 30 минут. Затем освободите лигатуру и подтвердите реперфузию, наблюдая за покраснением обесцвеченной области сердечной мышцы в течение одной-двух минут. После коронарной окклюзии и реперфузии закройте грудную клетку слоями и дайте мышам восстановиться в течение примерно получаса.
Повторно измерьте CFR через 1, 3, 5, 8, 24 и 48 часов после реперфузии, как показано ранее. Перед операцией ишемической реперфузии был измерен исходный уровень CFR, и у мышей было нормальное значение CFR. Однако после операции наблюдалось заметное снижение CFR после одного часа реперфузии.
По мере увеличения времени реперфузии значения CFR оставались стабильно низкими, что позволяет предположить, что гипоперфузия может сохраняться в течение как минимум двух дней. Не наблюдалось существенных изменений в функции сердца левого желудочка при значительном снижении CFR у мышей.
