Для начала установите мышь C57 Black/6 JRj под наркозом. Лежа на спине на отапливаемом операционном столе. Подтвердите отсутствие рефлекторных реакций на защемление пальцев ног.
Распылите на мышь 70% этанола, чтобы волосы не прилипали к ножницам. С помощью ножниц сделайте надрез брюшной полости у основания, разрезая вверх с обеих сторон к грудной клетке, чтобы обнажить брюшную полость. С помощью ватного тампона переместите кишечник вправо, обнажив воротную вену.
С помощью изогнутых щипцов поместите две лигатуры под воротную вену и неплотно завяжите каждую лигатуру. Далее введите 0,7-миллиметровый катетер в воротную вену. При перфорации извлеките иглу из катетера и проведите катетер через вену до тех пор, пока кончик катетера не приблизится к печени.
Затем затяните лигатуры. Понаблюдайте за печенью. Установите расход от роликового насоса и прикрепите трубку для продукции.
Инициируйте обильность печени при 37 градусах Цельсия. Как только печень побледнеет, с помощью ножниц разрежьте грудную клетку и диафрагму. Затем с помощью тонкоточечных щипцов поместите лигатуру под надпеченочную нижнюю полую вену.
Далее введите катетер в надпеченочную нижнюю полую вену через правое предсердие сердца. При перфорации извлеките иглу и проведите катетер через вену ближе к печени. Затем затяните лигатуру.
Прикрепите трубку для сбора перфузионного стока и закрепите все трубки водонепроницаемой лентой. С помощью адаптера для зажима сосудов поместите зажим для сосудов поперек подпеченочной полой вены непосредственно над правой почечной веной, чтобы предотвратить замирание смеси. Далее увеличьте скорость перфузионного потока до 3,5 миллилитров в минуту.
Запустите таймер и запись давления. Накройте печень стерильной простыней, смоченной в физрастворе, отбалансируйте в течение 30 минут, и отмерьте объем стока. После 30 минут уравновешивания начните эксперимент для сбора первой исходной пробы в коллекторе фракций.
Регулярно контролируйте пузырьковую ловушку и пополняйте ее перфузионным буфером, когда она близка к пустоте. Соберите образец буфера с помощью трехстороннего запорного крана непосредственно перед его попаданием в орган и из собирающего катетера, вставленного в нижнюю полую вену. С помощью анализатора газов крови измерьте собранный образец, чтобы подтвердить, что орган метаболически активен.
После 15 минут исходной перфузии с помощью шприцевого насоса начните первую стимуляцию, вводя исследуемое вещество через трехходовой запорный кран с желаемой скоростью потока. После моделирования соберите исходные образцы в течение 20–30 минут перед началом второй стимуляции. Продукция мочевины в перфузированной печени с устойчивыми исходными периодами, предшествующими каждому из двух периодов стимуляции, позволяет предположить, что реакция мочевины на две последовательные стимуляции смешанными аминокислотами является постоянной.
Наблюдалось устойчивое базальное высвобождение глюкозы и неэтерифицированных жирных кислот. Перед устойчивым повышением уровня глюкозы и жирных кислот, не относящихся к ЭД, во время инфузии глюкагона. Среднее значение в базальном состоянии и во время инфузии глюкагона позволяет предположить, что глюкагон быстро стимулирует гликогенолиз и липолиз печени.
Однако без устойчивых базальных периодов становится невозможным отличить одну реакцию мочевины от следующей.
