Для начала расположите мышь под наркозом на операционном столе. Поддерживайте температуру тела с помощью ректального зонда, подключенного к грелке. Сделайте надрез на коже головы в направлении сагиттального шва, начиная от ушей и заканчивая областью между глазами.
Втяните кожу и удалите надкостницу с правой стороны черепа. Затем найдите координаты, расположенные в 2,5 миллиметрах от брегмы. Нанесите цианоакрилат на доплеровский держатель и прикрепите его для лазерно-доплеровской флоуметрии.
После того как клей высохнет, подключите доплеровский щуп. Затем проверьте правильность показаний сигнала для оценки мозгового кровотока. Чтобы выполнить окклюзию артерии, необходимо перевернуть мышь в лежачее положение и зафиксировать ее к операционному столу медицинским скотчем.
Затем сделайте разрез по средней линии на шее. Оттяните кожу в сторону, а затем оттяните слюнные железы с помощью ретракторов. При этом обнажается сонная территория.
Определите сосудистую анатомию общей сонной артерии, или CCA, ICA и ECA, а также различные артерии, происходящие от них. Для облегчения работы отделите ОСА, а затем ЭХА от соединительной ткани. Затем прижгите верхнюю щитовидную артерию и отделите ВСА от соединительной ткани.
Проверьте еще раз, чтобы убедиться, что основные артерии полностью отделены от соединительной ткани. Затем оберните 6-0 шелковыми швами вокруг ECA в месте бифуркации языка верхней челюсти. Затем наложите шов вокруг ОСА.
Поместите сосудистый зажим, прерывающий циркуляцию крови из ВСА. Сделайте небольшой надрез в ЭКА рядом с областью, где находится тугой узел. Вводите мононить до тех пор, пока толстый слой полностью не проникнет в просвет артерии.
Затяните второй узел, чтобы удержать мононить внутри артерии и предотвратить выталкивание ее наружу под давлением крови. Разрежьте ЭКА ниже первого узла и поверните пень, чтобы сориентировать его в направлении ВСА. Продвигайте мононить через ICA до того места, где MCA ответвляется.
Окклюзия выражается в резком падении кровотока в показаниях LDF. Через 40 минут снова обезболите мышь и положите ее обратно на операционный стол. Снимите швы с горловины.
После 45 минут окклюзии ослабьте узел, удерживающий мононить на месте. Медленно и осторожно потяните за нить и проверьте, происходит ли реканализация тканей. Затем вытяните нить и затяните узел, чтобы предотвратить потерю крови, очистите кровь и развяжите узел CCA.
Убедитесь в отсутствии повреждения артериальной стенки. Удалите ретракторы и переместите мышцы, железы и кожу. Зашить кожу с помощью шва 6-0 и нанести дезинфицирующее средство.
Отсоедините доплеровский щуп и отсоедините держатель. Наконец, наложите швы и продезинфицируйте кожу головы. Исход транзиторной процедуры окклюзии средней мозговой артерии оценивали с помощью нейровизуализации МРТ in vivo.
Эволюция поражения, оцененная в разные моменты времени после реперфузии, показала, что прогрессирование объема поражения занимает примерно два дня. Поведенческие тесты, такие как тест на силу хвата, показали потерю силы у мышей после 24 часов транзиторной окклюзии средней мозговой артерии. Кроме того, при стимуляции в угловом тесте мыши показали предпочтение поворачиваться в правую сторону, которая была ипсилатеральной по отношению к поражению, что указывает на успешную окклюзию средней мозговой артерии с правой стороны.
