Для начала возьмите подготовленные образцы человеческих фекалий. Охладите высокоскоростную рефрижераторную центрифугу до 4 градусов Цельсия. Используйте PBS для регулировки веса пробирок с образцами до 0,1 грамма и центрифугируйте их при 3000 G в течение 20 минут при 4 градусах Цельсия.
С помощью пластиковой пипетки перенесите надосадочную жидкость в две пробирки по 50 миллилитров, оставив 1 миллилитр. Затем центрифугируйте надосадочную жидкость при 12 000 G в течение 30 минут при 4 градусах Цельсия. С помощью шприца объемом 20 миллилитров аспирируйте надосадочную жидкость, и извлеките иглу из шприца.
Отфильтруйте жидкость через фильтры 0,22 микрометра в пробирки объемом 50 миллилитров. Затем протрите ведро 75%-ным спиртом, чтобы удалить остатки загрязнений. Перенесите примерно 30 миллилитров отфильтрованной фекальной надосадочной жидкости в ультрацентрифужную пробирку.
Наполните трубку примерно 8 миллилитрами PBS, оставив зазор в 3 миллиметра от отверстия трубки. Поместите две ультрацентрифужные пробирки в противоположные ведра для ультрацентрифугирования и уравняйте вес двух ведер с помощью PBS. Загрузите все ковши на ротор, независимо от того, загружены ли они трубами.
Поместите образцы в центрифугу, инициируйте вакуум и вращайте их при 160 000 G в течение 70 минут при температуре 4 градуса Цельсия. Как только центрифугирование завершится, выпустите вакуум из камеры и откройте дверцу ультрацентрифуги. Затем своевременно снимите ротор.
Переложите ведра с ротора на стеллаж, а трубки поднимите с помощью кусачки. Выбросьте надосадочную жидкость, а видимые коричневые гранулы сохраните. Добавьте 1 миллилитр предварительно охлажденного PBS для полной суспензии гранул.
Заполните трубку примерно 37 миллилитрами PBS, оставив зазор в 3 миллиметра от отверстия. После выполнения еще одного раунда ультрацентрифугирования выбросьте надосадочную жидкость и оставьте пробирку перевернутой на 5 минут. Удалите остатки раствора с внутренней стенки с помощью стеклоочистителей.
С помощью пипетки объемом 1000 микролитров добавьте 1,2 миллилитра предварительно охлажденного PBS для ресуспендирования гранул и перемешайте их с помощью пипетирования. Перелейте 1,2 миллилитра раствора PBS BEV из одной ультрацентрифужной пробирки в чистую микропробирку объемом 1,5 миллилитров.
