Получение электрокомпетентной культуры Agrobacterium tumefaciens для генной инженерии микроводорослей

Начните с разбавления 0,5 микролитров ночных культур культуры Agrobacterium tumefaciens с 50 миллилитрами автоклавной сверхчистой воды. Выложите 10 микролитров этой разведенной культуры на лизогенный бульон или ЛБ-тарелку. Выдерживайте пластину при температуре от 28 до 30 градусов Цельсия в течение одного-трех дней.

Теперь инокулируйте одну колонию в 20 миллилитров LB среды, дополненной рифампицином. Инкубируйте культуру в течение ночи при температуре от 28 до 30 градусов Цельсия. На следующий день закиньте 500 миллилитров простой среды LB в колбу шейкера с девятью миллилитрами ночной культуры.

Поместите культуры на шейкер при температуре от 28 до 30 градусов по Цельсию. После инкубации и разделения культур на пробирки охлажденные пробирки центрифугируют при температуре 4 градуса Цельсия и 4 000 G в течение 15 минут. С помощью пипетки удалите надосадочную жидкость и повторно суспендируйте каждую гранулу в 50 миллилитрах ледяной воды.

После центрифугирования и выброса надосадочной жидкости повторно суспендируйте гранулу в 25 миллилитрах ледяной воды в каждой пробирке. Центрифугируйте так же, как и раньше, затем повторно суспендируйте гранулу в одном миллилитре ледяного 10% глицерина. Теперь смешайте содержимое всех пробирок в одну 50-миллилитровую пробирку перед центрифугированием.

Наконец, после удаления надосадочной жидкости повторно суспендируйте гранулу в 400 микролитрах ледяного глицерина.