Дегенерация клеток сетчатки у головастиков Xenopus при цитотоксических внутриглазных инъекциях CoCl2

Используйте сачок, чтобы поймать головастиков из аквариумов и пересадите их в 50-миллилитровый раствор 0,005% бензокаина. Позвольте им оставаться в растворе до тех пор, пока они не перестанут реагировать на раздражители. С помощью ложки осторожно возьмите головастика и положите его спинной стороной вверх в маленькую чашку Петри, содержащую влажную салфетку.

Затем поместите образец под стереомикроскоп. Для начала возьмите заточенный капилляр, с помощью наконечника микропогрузчика загрузите 10 микролитров раствора хлорида кобальта. После этого поместите заполненный капилляр в обработчик микроинжектора, чтобы отломать кончик капилляра и отрегулировать объем выброса примерно на 30 нанолитров.

С помощью микроинъектора и стереомикроскопа введите капилляр, заполненный хлоридом кобальта, через хрусталик в глаз. Достигнув внутренней части глаза с помощью капиллярного кончика, выведите две капли примерно по 30 нанолитров на каждый глаз. После введения в правый глаз поверните чашку Петри на угол 180 градусов, чтобы ввести инъекцию в левый глаз.

Переложите чашку Петри, содержащую введенного головастика, в большую емкость, содержащую один литр воды для выращивания. Продолжайте наблюдать за головастиками до тех пор, пока они полностью не проснутся. Инъекция 10 миллимолярного хлорида кобальта приводила к специфической гибели колбочек фоторецепторов, в то время как инъекция 25 миллимоляров приводила к широкой гибели клеток сетчатки.

Иммуноокрашивание выявило отсутствие колбочек в сетчатке с 10 миллимолярными инъекциями хлорида кобальта, в то время как палочки были в значительной степени сохранены. После инъекций 25 миллимолярного хлорида кобальта были серьезно поражены как фоторецепторы, так и биполярные клетки.