Для начала поместите устройство «кишка на чипе» в сухую духовку, установленную при температуре 60 градусов Цельсия, на 30 минут, чтобы удалить влагу. Затем, используя УФ-генератор озона, подвергните устройство воздействию ультрафиолета и озона в течение 60 минут. Закрепите впускную, перепускную и выпускную трубки верхнего микроканала с помощью зажимов для связующих.
Установите входную трубку для нижнего микроканала, затем отсоедините выпускную трубку для нижнего микроканала. Убедитесь, что перепускная трубка нижнего микроканала остается открытой. С помощью микропипетки Р100 добавьте 100 мкл 1%-ного раствора полиэтиленимина через выходное отверстие нижнего микроканала.
Подсоедините выпускную трубку для нижнего микроканала. Закрепите входную байпасную и выпускную трубки нижнего микроканала, а затем входную трубку верхнего микроканала с помощью зажимов для связующих. Теперь отсоедините выпускную трубку для верхнего микроканала, убедившись, что байпасная трубка остается открытой.
Далее добавляют 100 микролитров 1%-ного раствора полиэтиленимина через выпускное отверстие верхнего микроканала. Снова подсоедините выпускную трубку верхнего микроканала и дайте устройству инкубироваться при комнатной температуре в течение 10 минут. Повторите процедуру с 0,1% глутаровым альдегидом, а затем с деионизированной водой, чтобы удалить излишки раствора для активации поверхности.
Сушите чипсы в течение ночи при температуре 60 градусов Цельсия в духовке. На следующий день достаньте чипс из духовки и дайте ему остыть в шкафу биобезопасности в течение 10 минут. Закрепите впускную, перепускную и выпускную трубки верхнего микроканала, включая входную трубку нижнего микроканала, с помощью зажимов для связующих.
Отсоедините выпускную трубку для нижнего микроканала. Добавьте 20 микролитров внеклеточного матрикса, или смеси ECM, через выходное отверстие нижнего микроканала. Затем снова присоедините выпускную трубку для нижнего микроканала.
Закрепите впускную, перепускную и выпускную трубки нижнего микроканала, включая входную трубку верхнего микроканала, зажимами для связующих. Отсоединив выпускную трубку для верхнего микроканала, добавьте 20 микролитров смеси VCM через выпускное отверстие верхнего микроканала. Снова подсоедините выпускную трубку верхнего микроканала, а затем снимите зажим связующего с выпускной трубки нижнего канала, убедившись, что обе выпускные трубки открыты.
Поместите чип в инкубатор с температурой 5% углекислого газа при температуре 37 градусов Цельсия на один час.
