Клонирование растворенных носителей (SLC) в бакмид pHTBV1.1 для высокопроизводительной экспрессии белка

Для начала добавьте 150 нанограмм растворенного вещества-носителя, или клон SLC, и 100 нанограммов вектора в 96-луночный планшет. Сделайте реакцию объемом до 8 микролитров с 10 миллимолярным раствором триса pH 8. Затем добавьте 2 микролитра смеси рекомбинантных ферментов и выдержите в течение одного часа при комнатной температуре.

После инкубации добавьте 1 микролитр протеиназы К и инкубируйте в течение 30 минут при температуре 37 градусов Цельсия. Добавьте 4 микролитра реакционной смеси к 50 микролитрам химически компетентных клеток E.coli Mach1 и трансформируйте клетки методом теплового шока. После трансформации нанесите бактериальную суспензию на агаровую пластину LB.

Идентификация колоний, несущих вектор pHTBV1.1, с помощью генной вставки SLC с использованием соответствующих праймеров и стандартных протоколов для ПЦР колоний.