Ферментативная дезагрегация слухового эпителия с получением слуховых волосковых клеток

Для начала выделите слуховой эпителий из височной кости новорожденных мышей и перенесите его в 10 миллилитров свежего DMEM, содержащего 0,25% трипсина, инкубируйте смесь при температуре 37 градусов Цельсия в течение 12 минут. С помощью наконечника пипетки объемом 200 микролитров аккуратно отделите волосковые клетки от базальной пластинки и других клеток с помощью операционного микроскопа. Затем добавьте еще 10 миллилитров питательной среды, чтобы подавить дезагрегацию.

Отфильтруйте взвешенные клетки через фильтр 70 микрометров. Соберите фильтрат в чистую 50-миллилитровую пробирку и центрифугируйте его при 300G в течение пяти минут. С помощью наконечника для пипетки объемом 1000 микролитров восстановите суспендию волосковых клеток в пяти миллилитрах питательной среды с помощью осторожного пипетирования.

Теперь заранее поместите крышку на дно шестилуночной пластины. Подсчитайте клетки и культивируйте их при плотности от 10 до 6 клеток на миллилитр в шестилуночном планшете, вырастите адгезивные клетки в двух миллилитрах DMEM при 37 градусах Цельсия и 5% углекислом газе. После одного дня культивирования волосяные клетки прочно прилипли ко дну посуды.

К третьему дню количество ячеек увеличилось в два раза.