Культивирование клеток bEnd.3 и жизнеспособность клеток после лечения CoCl2

Для начала приготовьте среду для культивирования клеток DMEM, содержащую FBS, пенициллин и стрептомицин. Кроме того, приготовьте 100 миллимолярный исходный раствор хлорида кобальта, добавив 1,30 миллиграмма хлорида кобальта на 100 микролитров ДМСО. Затем посейте один миллилитр клеток BEND3 в 100-миллилитровую чашку для культивирования, содержащую среду DMEM и культуру при температуре 37 градусов Цельсия, во увлажненной атмосфере с содержанием 5% углекислого газа.

Меняйте среду каждые два-три дня и субкультивируйте клетки два раза в неделю. После того как клетки BEND3 вырастут до 80% конфлюенции, расщепляют клетки с 0,25% трипсина в течение 30 секунд. Посчитайте клетки с помощью счетчика клеток и сделайте суспензию плотности семь умножить на 10 до четвертой клетки на миллилитр.

Затем засейте 100 микролитров этой клеточной суспензии в 96-луночный планшет для клеточной адгезии. Затем промойте клетки PBS и добавьте 100 микролитров питательной среды, содержащей хлорид кобальта. Культивируйте клетки в течение 24 часов.

После инкубации удалите среду и промойте PBS. Далее добавляем 100 микролитров раствора СЦК-8. Инкубируйте планшеты при температуре 37 градусов Цельсия в течение одного часа, затем измерьте поглощение на 450 нанометрах с помощью считывателя микропланшетов.

Рассчитайте жизнеспособность клеток, индуцированную хлоридом кобальта по этой формуле. Выберите концентрацию с существенной разницей в снижении жизнеспособности клеток по сравнению с контрольной группой. С помощью CoCl2 анализировали жизнеспособность клеток BEND3, обработанных различными концентрациями хлорида кобальта.

Результаты показали, что 300 микромоляров хлорида кобальта проявляли значительную цитотоксичность in vitro.