Для начала подготовьте иглу-бабочку 23G, разрезав ее пластиковую защиту рукава таким образом, чтобы конец голой иглы был открыт на 7 миллиметров. Затем соедините иглу-бабочку с полимерной трубкой со шприцем объемом 1 миллилитров. Поместите крысу под наркозом на стереотаксическую рамку и поддерживайте анестезию через маску для лица.
Далее снимите шерсть с задней части головы и шеи крысы. Зафиксируйте голову крысы ушными планками. Переместите носовую планку стереотаксической рамы, чтобы опустить голову животного примерно на 45 градусов по вертикали.
Найдите слегка вдавленную поверхность на задней части головы с аспектом ромба между затылочным выступом и атлантом позвоночника. Натрите поверхность 70%-ным этанолом. Для сбора спинномозговой жидкости вставьте иглу-бабочку вертикально в центр ромбовидной вдавленной поверхности в большую цистерну до тех пор, пока движение не будет заблокировано пластиковой защитой иглы.
Осторожно втяните поршень шприца, чтобы спинномозговая жидкость медленно протекала через иглу. Соберите около 100 микролитров ликвора в полимерную трубку. Сожмите полимерную трубку очень близко к игле бабочки и разрежьте трубку в этом месте.
Наберите прозрачный образец в шприц. Изгоните образец в стерильную микропробирку объемом 0,2 миллилитра и храните на льду до одного часа. Продезинфицируйте место забора ликвора на голове животного.
Извлеките крысу из стереотаксической рамки и посадите ее обратно в клетку. Отложите 2 микролитра образца для контроля качества, а остальное храните при температуре 80 градусов Цельсия для дальнейшего анализа. Повторное изъятие спинномозговой жидкости проводилось в течение пяти дней в трех экспериментальных группах крыс и выражалось в процентах от успешных выводов, которые привели к прозрачной спинномозговой жидкости.
У крыс с двойным имплантатом головы, канюлированных для удаления спинномозговой жидкости, вероятность успеха составила 71,1%, что указывает на то, что канюля на голове животного может мешать повторному отбору проб спинномозговой жидкости. Напротив, когда сбор спинномозговой жидкости проводили с помощью большой пункции цистерны только у привязанных или телеметрических животных, имплантированных электродами, вероятность успеха составила 86,7% и 88,9%. Эти результаты свидетельствуют о том, что техника пункции больше подходит для многократного удаления спинномозговой жидкости у животных, имплантированных электродами.
