Для начала смажьте иглу-бабочку и ее трубку 1%-ным раствором калия ЭДТА. Разрежьте трубку сразу за иглой, чтобы собрать кровь по каплям. Поместите крысу под наркозом на стереотаксическую рамку, сохраняя анестезию через маску для лица.
Подложите под животное грелку, держа часть его хвоста в непосредственном контакте с подушечкой. Переместите животное назад так, чтобы оно было обращено в сторону, а латеральная хвостовая жилка была видна наверху. Опустите хвост в теплую воду, чтобы расширить боковую жилку.
Затем протрите хвост 70%-ным этанолом. Направьте теплый свет на хвост с помощью обычной лампы накаливания. Вставьте иглу-бабочку 21G в боковую хвостовую вену под углом 20 градусов на глубину до пяти миллиметров.
Затем соберите кровь в вакуумную пробирку объемом 500 микролитров, содержащую пять миллиграммов калия ЭДТА в качестве антикоагулянта. Извлеките иглу и остановите поток крови, надавливая на место прокола. Верните крысу в домашнюю клетку.
Далее аккуратно переверните трубку 10 раз, чтобы смешать антикоагулянт в крови. Сделайте во льду отверстия глубиной 1,5 сантиметра и поместите в них трубки вертикально. В течение одного часа после сбора образец крови центрифугируется в охлаждаемой центрифуге для отделения плазмы.
Затем аспирируйте около 200 микролитров плазмы, избегая слоя красных и белых кровяных телец. Поместите изъятую плазму в стерильную микропробирку объемом 0,2 миллилитров. Отложите пять микролитров образца для контроля качества и храните оставшийся образец при температуре минус 80 градусов Цельсия до анализа.
Кровь у крыс отбирали в пяти временных точках с использованием различных методов, таких как вакуумная техника на 52-й день, доение хвоста на 55-й день и техника капли на 58-64 день. Качество образцов плазмы, оцененных с помощью УФ-спектрофотометрии, показало, что плазма была розового цвета со средним значением поглощения 0,647 при использовании вакуумного метода. Аналогичным образом, техника доения хвоста привела к получению розового цвета плазмы со средней поглощающей способностью 0,620.
В отличие от этого, при использовании гравитационной системы отвода капель были получены прозрачные образцы плазмы со значительно сниженными средними значениями поглощения плазмы, что позволяет предположить, что эта процедура является оптимальной для получения высококачественных образцов для анализа.
