Подготовка ткани ЦНС к выделению клеток у мышей с ЭАЭ

Начните с того, что поместите мышь в лежачее положение и зафиксируйте конечности иголками. Нанесите 75% этанол на переднюю часть тела животного. Сделайте продольный разрез через кожу и фасцию на животе и грудной клетке.

Разрежьте ребра парастернально и загните грудную клетку вверх, чтобы получить свободный доступ к сердцу. Зафиксируйте загнутую вверх грудную клетку иглами. Откройте правое предсердие с помощью ножниц.

С помощью канюли внесите 20 миллилитров одноразового PBS в левый желудочек, чтобы вымыть кровь через разрезанное правое предсердие. Сделайте продольный разрез, разрезав кожу на макушке головы мыши, чтобы обнажить череп, и сместите кожу вокруг головы с помощью щипцов. Надрезать череп с помощью ножниц по сагиттальному шву.

Вставьте кончик ножниц по линии разреза, чтобы расколоть калотту. Удалите оставшиеся части калотты с помощью щипцов, чтобы мозг был полностью обнажен. Осторожно удалите мозг и поместите его в матрицу мозга мыши.

Разрежьте мозг на сагиттальные срезы толщиной в один миллиметр с помощью лезвия бритвы. С помощью ножниц разрежьте позвоночный столб чуть выше подвздошного гребня. Введите иглу 20 калибра, прикрепленную к 20-миллилитровому шприцу, содержащему одноразовый PBS, в спинномозговой канал.

Вымывайте спинной мозг из спинномозгового канала от каудального к краниальному. Разрежьте спинной мозг на сегменты длиной 0,5 сантиметра с помощью скальпеля. Храните суспензию клеток ЦНС, состоящую из головного и соответствующего спинного мозга, в чашке Петри, содержащей три миллилитра холодного DPBS.