Для начала поместите мышь на поддон для препарирования, оснащенный носовым конусом для введения анестезии. Проверьте рефлексы животного, такие как втягивание лапы, чтобы подтвердить, что анестезия достигла соответствующей глубины. Затем расположите мышь так, чтобы обнажить спинную кожу.
Смочите кожу достаточным количеством этанола 70%, чтобы предотвратить отслоение волос. Сделайте надрез вдоль спины, начиная с нижней части грудной клетки и продлив его вверх до шеи. С помощью щипцов с загнутым кончиком аккуратно приподнимают межлопаточную бурую жировую ткань и аккуратно разрезают прикрепленную ткань.
Поднимите жировую подушку по направлению к головке и продолжайте разрезать прикрепленные ткани, чтобы осторожно открыть область до тех пор, пока вена Зульцера не обнажится. Теперь аккуратно разрежьте вену Зульцера. С помощью наконечника для пипетки объемом 200 микролитров и пипетки P100 соберите примерно 40 микролитров крови и храните собранную кровь в пробирке для сбора крови.
Держите тюбик на льду до начала процесса сбора сыворотки. Обильно увлажните брюшную кожу 70% этанолом, чтобы предотвратить отслоение волос. С помощью ножниц осторожно вскройте грудную полость, чтобы обнажить сердце.
С помощью одномиллилитрового шприца, оснащенного полудюймовой иглой 29-го калибра, точно проколите верхнюю часть левого желудочка. Введите две трети иглы примерно на три-пять миллиметров вправо от горизонтали верхушки сердца и потяните шприц назад, чтобы собрать кровь из левого желудочка. Затем центрифугируйте образцы крови при 10 000 G в течение 10 минут при четырех градусах Цельсия.
С помощью пипетки соберите надосадочную жидкость и приступайте к извлечению и анализу метаболитов.
