Для начала случайным образом распределите мышей, чья ротовая полость отрицательна на рост кандиды, на девять групп, каждая из которых соответствует разной концентрации куркуминоидов при освещении или без него. В первые сутки подкожно вводят иммуносупрессивный препарат преднизолон всем участникам групп. Обеспечьте тетрациклина гидрохлорид в концентрации 0,83 мг на миллилитр в питьевой воде с первого дня и до конца эксперимента.
На второй день введите хлорпромазина хлорид внутримышечно на каждую мышцу бедра, чтобы успокоить мышь для внутриротовой инокуляции. Затем погрузите стерильный тампон в свежеприготовленную стандартизированную суспензию Candida albicans. Поместив мышь в лежачее положение, потрите ее язык смоченным тампоном в течение 30 секунд.
На пятый день введите бесплатную подкожную инъекцию преднизолона для поддержания иммуносупрессии. На седьмой день, перед лечением, поместите мышь под наркозом в лежачее положение на PAD-устройство, оснащенное нитками. Обмотайте нить вокруг резцов, чтобы рот оставался открытым.
Нанесите 70 микролитров фотосенсибилизатора на тыльную сторону языка каждой мыши, относящейся к группам C+L+. Затем переместите язык обратно в ротовую полость и подержите мышь в темноте в течение 20 минут в качестве периода перед облучением. После периода фотосенсибилизации поместите светодиодное устройство на тыльную сторону язычка и подсвечивайте его в течение семи минут.
Нанесите фотосенсибилизатор на группы C+L, как показано на рисунке, и держите мышей в темноте в течение 27 минут. Сразу после лечения возьмите мазок с тыльной стороны языка в течение одной минуты, используя стерильный ватный тампон для извлечения Candida albicans из языка. Поместите каждый тампон с образцом в пробирку, содержащую один миллилитр стерильного физиологического раствора и вортекса, на одну минуту для ресуспендирования микробных клеток.
Без промедления выполнить десятикратное серийное разведение в PBS и наложить 25 микролитров аликвоту на пластины Sabouraud Dextrose Agar в двух экземплярах. Инкубируйте планшеты аэробно при температуре 37 градусов Цельсия в течение 48 часов. Через 48 часов используйте цифровой счетчик колоний, чтобы определить количество колоний дрожжей.
Рассчитайте нагрузку Candida albicans для каждого животного. На восьмой день, после правильной усыпления животного, приступайте к хирургическому удалению языка, выполняйте удаление языка перед околоплодными сосочками, чтобы убедиться, что весь язык удален. Наконец, приступают к гистопатологическому анализу изолированного языка.
Мышиная модель кандидоза полости рта показала типичные белые пятна и псевдомембраны на языке инфицированных мышей. Антимикробная фотодинамическая терапия снижала жизнеспособность Candida albicans при концентрации куркуминоидов 80 микрометров. Языки неинфицированных животных показали нормальные здоровые ткани, в том числе: неповрежденную собственную пластинку, базальную мембрану и нитевидные сосочки.
В группе C-L дрожжи и филаменты наблюдались в ороговевшем эпителиальном слое. В подлежащей соединительной ткани присутствовала легкая воспалительная реакция. Напротив, у мышей, получавших антимикробную фотодинамическую терапию, опосредованную 80 микромолярными куркуминоидами, было меньше грибковых клеток в ороговевшем слое эпителия языка.
