Чтобы выполнить серийное разведение с помощью луночного планшета, сначала поместите суспензии микобактерий на ряды А и Е 96-луночного планшета. Добавьте 180 микролитров деионизированной воды в оставшиеся лунки для процесса серийного разбавления. Используя 12-канальную пипетку, повторно суспендируйте суспензию в ряду А и перенесите 20 микролитров в ряд В. Повторите перенос суспензии для рядов В и С до тех пор, пока не будет достигнуто последнее разведение в ряду D. Для покрытия микрокапель используйте многоканальную пипетку объемом от 0,5 до 10 микролитров с тонкими наконечниками, чтобы перенести пять микролитров с каждого ряда 96-луночного планшета на твердый средний квадратный планшет.
Позвольте каплям слегка коснуться агара, обеспечивая надлежащий перенос и минимизируя задержку жидкости внутри наконечника. Дайте каплям высохнуть и закройте агаровую пластину. Инкубируйте его при температуре 37 градусов Цельсия, наблюдая за ростом бактерий.
По желанию поместите агаровые пластины в герметичный полиэтиленовый пакет, чтобы предотвратить высыхание. После 6-10 дней инкубации проверьте наличие отдельных колоний, видимых невооруженным глазом. Поместите пластину под инвертированный микроскоп с объективом наименьшего увеличения.
В качестве альтернативы можно использовать камеру, чтобы сфотографировать каплю, и вручную подсчитать колонии на компьютере с помощью ImageJ для автоматического подсчета колоний. Микроколониеобразующая единица или микро-КОЕ анализ использовался для получения большого количества данных из небольшого количества агаровых пластин. Использование липосом для доставки саквинавира повысило эффективность лечения в отношении штаммов микробактерий с различной лекарственной устойчивостью.
