Для начала центрифугируйте человеческую кровь при 120 G в течение 20 минут при комнатной температуре, чтобы удалить клетки крови. Затем переложите верхнюю половину надосадочной жидкости в новую трубку. Затем центрифугируйте обогащенную тромбоцитами плазму, чтобы удалить тромбоциты, и перенесите верхнюю половину надосадочной жидкости в новую пробирку.
Затем удалите остатки клеток, центрифугируя тромбоциты в нашей плазме при 13 000 G в течение двух минут. Переложите верхнюю половину надосадочной жидкости в новую трубку. Включите анализатор тромбов, чтобы обнаружить внеклеточный пузырь или активированное EV время свертывания, и нагрейте прибор до 37 градусов Цельсия.
Установите одноразовый щуп и контрольный стаканчик. Затем начните процедуру контроля качества машины. После запуска контроля качества введите информацию об образце в систему.
Затем добавьте в тестовый стаканчик 200 микролитров плазмы, богатой EV, а затем 20 миллимоляров, 170 микролитров хлорида кальция. Нажмите кнопку «Пуск», закройте крышку и дайте датчику обнаружить изменение сопротивления образца. Неквалифицированные образцы EV демонстрируют отчетливый кластер с немного большим размером частиц вблизи затвора EV.In контраст, квалифицированные образцы с высоким содержанием EV показали большинство сигналов внутри затвора EV как единую группу.
Увеличение концентрации EV сокращало время свертывания, активируемого EV, в то время как снижение концентрации EV продлевало время свертывания, активируемого EV. Образцы обогащенной EV плазмы от пациентов с преэклампсией, переломами бедра и раком легких имели значительно более короткое время свертывания, активированного EV, по сравнению со здоровыми добровольцами.
