Для начала зашнуруйте мышь, находящуюся под наркозом, на спине в системе визуализации, а морду в носовом конусе. Расположите мышь таким образом, чтобы голени были вытянуты, а колени слегка направлены в воздух. Откройте совместимое программное обеспечение на компьютере системы обработки изображений.
На панели управления захватом нажмите «Инициализировать», чтобы прогреть систему, и подождите, пока индикатор температуры не загорится зеленым. Затем нажмите на «Мастер обработки изображений». После нажатия на пару фильтров убедитесь, что настройка настроена на эпиподсветку.
Затем нажмите далее. В раскрывающемся списке найдите интересующий вас зонд, чтобы выбрать правильные настройки возбуждения и излучения, и нажмите кнопку «Далее». Выберите мышь для съемки.
В параметрах экспозиции убедитесь, что отмечены автоматические настройки и выбраны параметры флуоресценции и фотографии. В чек-листе поля зрения выберите D до 22,6 сантиметра и нажмите кнопку далее. Убедившись, что все настройки верны, нажмите кнопку «Захватить последовательность» и подтвердите, что изображение получило достаточную экспозицию.
Чтобы проанализировать изображение, поместите круг области интереса одинакового размера над каждым коленным суставом на черно-белом изображении. Рассчитайте общую эффективность излучения и среднюю эффективность излучения для каждого коленного сустава. Если лучевая эффективность рассчитывается также на контралатеральных ногах, нормализуйте данные, разделив измерение лучевой эффективности для поврежденной ноги на измерение контралатеральной ноги.
Флуоресцентная отражательная визуализация показала значительно большую активность протеазы в поврежденных суставах мышей по сравнению с неповрежденными мышами. Поврежденные суставы показали на 43% большую среднюю лучевую эффективность по сравнению с контралатеральными суставами и суставами нетравмированных мышей. В поврежденных суставах наблюдалась на 30-80% большая лучистая эффективность по сравнению с контралатеральными суставами через две недели после травмы.
Напротив, хирургически оперированные суставы показали на 300% большую луистую эффективность на четвертой неделе по сравнению с контралатеральными суставами, что свидетельствует о заметном искажающем эффекте хирургического вмешательства.
