Для начала возьмите полиэтиленовую полиэтиленовую пленку длиной 16 сантиметров, шириной 12 сантиметров и толщиной 20 микрометров. С помощью инструмента для шлифовки стекла выдавите 30 полукруглых выступов в стандартной 96-луночной схеме ПЦР. Подвергните обе стороны прессованной полиэтиленовой пленки воздействию ультрафиолетового света в течение одного часа, чтобы продезинфицировать ее.
Добавьте небольшое количество 10% поливинилового спирта на полукруглую поверхность. Затем поместите около 3000 обезболенных самок ос trichogramma dendrolimi в ящик для сбора. Поместите выпуклую сторону пленочной карты для яиц в сторону коробки для сбора и закрепите края резинкой.
Теперь добавьте четыре микролитра аминокислотного раствора в каждый выступ. Затем накройте его еще одним куском полиэтиленовой пленки. С помощью резиновой ленты плотно накройте ящик для сбора с двумя листами пластика.
Дайте осам свободно паразитировать в течение четырех-восьми часов. Обеспечьте 10%-ную воду сахарозы через влажный хлопок во время паразитирования. Далее получают паразитированный аминокислотный раствор из внутреннего выступа искусственной яичной карточки и переносят его в колпачок 1,45 миллилитровых пробирок.
Накройте крышку трубки капроновой сеткой толщиной 10 микрометров, имеющей диаметр 25 миллиметров. Затем слегка закрепите капроновую сетку в трубке. Центрифугируйте верхнюю правую пробирку при 1, 360 г в течение 10 секунд.
Соберите отфильтрованный раствор, содержащий яд. Храните яд при температуре минус 80 градусов Цельсия для дальнейших анализов. Анализ образцов яда показал, что концентрация белка яда варьировалась от 0,35 до 0,46 микрограмма на микролитр.
Отрицательный контроль раствора аминокислоты имел концентрацию белка только от 0,03 до 0,05 мкг на микролитр. Анализ яда SDS-PAGE показал, что диапазон белка варьируется от менее 10 килодальтон до более чем 130 килодальтон.
