Чтобы извлечь данные анализа Брэдфорда из изображений микропланшета, записанных с помощью камеры смартфона, загрузите программное обеспечение image J и плагин ReadPlate, доступный в виде текстового файла. Открыв изображение J, нажмите «Плагины», а затем «Установить» и выберите загруженный текстовый файл плагина ReadPlate. Установите параметры измерения, нажав на кнопку "Анализ", а затем на кнопку "Установить измерения" и отметьте галочкой параметры:Площадь, Стандартное отклонение, Минимальное и максимальное значение серого, Среднее значение серого, Модальное значение серого.
В нижней части окна установите для параметра Перенаправление значение Нет, а для параметра Десятичный разряд значение ноль — значение 9 как 3. Перейдите в раздел «Файл». Нажмите «Открыть» и выберите фотографию микропластины, сделанную с помощью смартфона.
Перейдите в раздел Плагины, а затем в ReadPlate. Прочтите инструкции и нажмите OK. Выберите Количество скважин равным 96. С помощью автоматически загруженного плагином инструмента прямоугольного выделения создайте прямоугольник, начинающийся в центре лунки А1 и заканчивающийся в центре лунки Н12, затем нажмите ОК. Выберите Синий канал и нажмите OK. Затем подтвердите параметры по умолчанию, нажав на кнопку «ОК». Проверьте, очерчено ли программное обеспечение область внутри каждой скважины, и не покрывают ли выбранные области области с аномальными тенями или отражениями.
После установки флажка нажмите OK. Сохраните результаты, прежде чем повторить то же самое для зеленого канала. Рассчитайте соотношение синего и зеленого, используя режим для каждого цвета. Данные о цвете RGB, полученные автоматически из изображения микропланшета, показали типичное увеличение значений синего цвета и уменьшение значений красного и зеленого для стандарта BSA.
Кроме того, цветовые данные, извлеченные из изображения, точно отражали показания поглощения, зафиксированные на 450 и 590 нанометрах. Стандартная кривая, полученная с извлеченными цветовыми данными, отображающими зависимость сигнала от концентрации БСА, оказалась линейной, как и ожидалось. Была получена линейная зависимость между разбавлением образца и сигналом как для показаний абсорбции, так и для извлеченных цветовых данных в двух разных образцах белка.
Для обоих образцов белка некоторые разведения не находились в линейном диапазоне стандартной кривой. Однако, после игнорирования этих моментов, уровни белка, рассчитанные с использованием данных RGB для обоих образцов, совпали с уровнями, рассчитанными с использованием показаний поглощения.
