Внутриузловое введение клеток B16F10-GP в паховый лимфатический узел мышей

Начните с аспирации 20 микролитров суспензии клеток меланомы B16F10-GP с помощью инсулинового шприца 100-U. Удалите пузырьки из шприца. Далее мыши, перенесшей операцию по резекции опухоли, вводят клеточную суспензию в один паховый лимфатический узел.

Введите иглу из дистального конца лимфатического узла и медленно переместите ее к центру лимфатического узла. Наблюдают значительное увеличение лимфатического узла, показывающее, что жидкость введена точно. Введите равный объем PBS в паховый лимфатический узел с другой стороны.

Зашить разрез шовным материалом 3-0. Продезинфицируйте кожу вокруг раны повидон-йодом, затем поместите мышь в чистую клетку и поддерживайте тепло с помощью инфракрасного света. Держите мышь в положении бокового пролежня и непрерывно наблюдайте до тех пор, пока сознание не восстановится.

После имплантации клетками B16F10-GP метастазирование в лимфатические узлы наблюдалось по окрашиванию гематоксилином и эозином. На ранней стадии метастатический лимфатический узел был частично занят опухолевыми клетками, при этом некоторые участки все еще содержали непораженные лимфоциты. К поздней стадии метастатический лимфатический узел был заполнен опухолевыми клетками, что сопровождалось опухолевым ангиогенезом.

Кроме того, частота антиген-специфических CD8-положительных Т-клеток в периферической крови составила 2,81% на ранней стадии, которая снизилась до 1,48% на поздней стадии. Интересно, что в то время как процент CD8-положительных Т-клеток оставался стабильным в неметастатических лимфатических узлах, он временно повышался в метастатическом лимфатическом узле на ранней стадии, но резко снижался на поздней стадии.