Для начала добавьте в чистую банку 150 миллилитров чистых пятимиллиметровых стеклянных шариков и закройте крышкой. Накройте закрытую банку достаточным количеством алюминиевой фольги, чтобы скрыть крышку на стыке банки и автоклав при температуре 121 градус Цельсия на 20 минут. Когда рассада будет готова к пересадке в банку на стерильную скамейку, снимите алюминиевую фольгу и крышку банки.
Добавьте в банку 35 миллилитров полукрепкой среды Мурасигэ и Скуга с pH от 5,7 до 5,9 и перемешайте шарики, чтобы они равномерно покрылись средой. Поместите в банку от трех до пяти саженцев, убедившись, что корневая система размещена между стеклянными бусинами. Отрегулируйте бусины стерильными щипцами или ложками, чтобы покрыть корни и поднять листья из среды.
Закрепите две полоски микропористой ленты по 1,25 см поперек верхней части банки и аккуратно накройте крышкой. Закройте зазор между крышкой и банкой 2,5-сантиметровой микропористой лентой, чтобы сохранить стерильность и обеспечить воздухообмен, и поместите банку в камеру для выращивания. Когда растения достигнут нужного возраста, снимите микропористую ленту и крышку с банки.
Нанесите 20 микролитров питательной среды на агаровую пластину LB для испытания на стерильность. С помощью объемной пипетки объемом 25 миллилитров удалите как можно больше среды для роста, не повредив корни. Добавьте 50 миллилитров собирательной среды вдоль стенки банки, чтобы предотвратить намокание листьев.
Закройте банку крышкой и выдерживайте в стерильных условиях в течение двух часов. После инкубации удалите нужное количество собирательной среды в пробирки. Измерьте вес корня и побега с растения в одной банке, чтобы нормализовать корневые выделения по массе растения.
Растения Arabidopsis thaliana выглядели здоровыми в двух разных лабораториях. Система стеклянных банок оказалась пригодной для различных видов растений и стадий развития. Пшеница имела самый высокий вес желоба, за ней следовали сорго и помидоры.
В то время как сорго имело наибольший вес корней, за ним следовали пшеница и Medicago truncatula. Инокуляция Arabidopsis thaliana комменсальными бактериями не изменяла фенотип растения, и инокулированные бактерии сохранялись в системе не менее 12 дней с небольшим увеличением колониеобразующих единиц.
