Двухфотонная прижизненная микроскопия на мышиной модели глиобластомы

Начните с введения клеток глиомы C6 в поверхностные области мозга мышей, чтобы создать мышиную модель глиобластомы. Затем закрепите перекладину в черепном окне и дайте мышам восстановиться. После этого внутривенно вводят мышам флуоресцентные меченые наночастицы, чтобы выполнить двухфотонную визуализацию мозга.

Немедленно включите лазер Ti:sapphire и выключатель основной системы. Затем запустите программное обеспечение для просмотра прерий. Теперь обездвижите мышь под двухфотонным микроскопом на специальном столике.

Поместите животное в положение лежа на грелку и закрепите лентой, не сдавливая грудную клетку. Добавьте каплю воды в краниальное окно и отрегулируйте фокусировку. Чтобы контролировать частоту сердечных сокращений животного и насыщение крови кислородом, расположите датчик на задней лапе.

Отрегулируйте положение головы. С помощью фильтра RFP найдите нужное поле изображения. После определения ориентации образца и поля обзора переключите микроскоп из широкоугольного режима в режим световой сканирующей микроскопии.

Убедитесь, что режим лазера Ti:sapphire заблокирован на 920 нм, и откройте все жалюзи. Отрегулируйте напряжение gasp PMT на 500–600 вольт. Нажмите кнопку Live image в программном обеспечении, чтобы начать создание изображения.

После получения четкого изображения используйте программное обеспечение и моторизованный предметный столик, чтобы установить верхнюю и нижнюю часть стека изображений в программном обеспечении. Медленно увеличивайте усиление pockel или PMT, чтобы компенсировать темноту на увеличении глубины. Задайте путь сохранения и запустите серию Z.

После завершения стека используйте воспроизведение, чтобы проверить стек на качество. После завершения визуализации переместите животное в клетку для восстановления. Выйдите из представления Prairie, убедитесь, что все данные сохранены и перенесены, затем выключите компьютер и все оборудование.

Ограниченное количество частиц подверглось экстравазации и видно в непосредственной близости от опухолевых клеток через 10 минут после введения наночастиц. Однако через 24 часа после введения наночастиц в глиобластоме видно большое количество частиц, что указывает на экстравазацию.