Индукция Pseudomonas syringae pv. помидор Инфекция DC3000 у Arabidopsis thaliana для автоматизированного измерения устьичного ответа

Для начала посадите семена Arabidopsis thaliana в почву. Выращивают их в камере с белым флуоресцентным светом. Затем инокулируют одну колонию Pseudomonas syringae pv.

томат DC3000 в 5 миллилитрах жидкой среды King's B. Инкубируйте культуру при температуре 28 градусов по Цельсию, встряхивая со скоростью 200 оборотов в минуту, пока культура не достигнет поздней логарифмической фазы роста. Центрифугируйте культуру при температуре 6 000 г в течение двух минут.

Затем повторно взвесьте бактериальную гранулу в одном миллилитре стерильной воды. Далее пипеткой выдавите надосадочную жидкость. И ресуспендировать гранулу в одном миллилитре буфера для вскрытия устьиц.

Измерьте оптическую плотность суспензии на длине волны 600 нанометров. Разбавляют бактериальную суспензию до оптической плотности 0,2 с буфером для вскрытия устьиц, содержащим 0,4% силиконового поверхностно-активного вещества. Чтобы инокулировать бактериальную суспензию, сначала поместите растения Arabidopsis thaliana на поднос, накрытый прозрачной крышкой, на свет не менее чем на три часа.

Снимите крышку. Затем с помощью аэрографа опрыскайте нижнюю сторону листьев бактериальной суспензией. После инокуляции инкубируйте растения на подносе, накрытом прозрачной крышкой, чтобы поддерживать относительную влажность около 85%