Для начала переместите щенков в отдельную клетку подальше от плотины. Перед началом процедуры инъекции с помощью препарирующего микроскопа подтвердите наличие межпозвонкового пространства или, как минимум, средней линии спинномозгового канала щенка. Загрузите в шприц объемом 25 или 10 микролитров 10 микролитров желаемого инъекционного вещества, такого как лекарственная форма, препарат вируса, или контролируйте искусственную спинномозговую жидкость и так далее.
После того, как животное будет полностью обезболино, что подтверждается уменьшением или отсутствием движений тела, осторожно поместите детенышей под микроскоп. Указательным и большим пальцами левой руки осторожно пальпируют межпозвонковое пространство по средней линии, расположенное между двусторонними тазовыми поясами. Осторожно слегка поверните основание хвоста, чтобы определить среднюю линию позвоночника.
Осторожно введите иглу, наклонив ее под углом от 70 до 80 градусов в месте пересечения углубления, при этом убедившись, что она остается выровненной по центральной сагиттальной плоскости. По мере того, как игла соприкасается с костью, постепенно уменьшайте угол примерно до 30 градусов и продвигайте иглу примерно на два миллиметра в межпозвонковое пространство. Медленно вводите до 10 микролитров объема в течение 50-60 секунд.
Удерживайте иглу на месте в течение 10–20 секунд после завершения инъекции. Извлеките иглу плавным вращением, чтобы избежать протекания. После инъекции положите щенка на грелку на 10–15 минут, чтобы он полностью восстановился и согрелся.
Интратекальная инъекция фаст-грин новорожденным дикого типа сразу же привела к широкому распространению введенного раствора. У мышей-репортеров YFP наблюдалась широкая экспрессия YFP по всему мозгу через 10 дней после интратекальной инъекции редактирования генов на основе CRISPR-Cas9.
