Обнаружение внутриклеточной кальциевой сигнализации в CD34⁺ стволовых клетках магнитно-изолированной сосудистой стенки

Для начала выделите CD34-положительные стволовые клетки резидентной сосудистой стенки из мышиных моделей. Получение чистых клеток путем магнитно-активированной сортировки клеток и их характеристика. Для обнаружения кальциевой сигнализации приобретите покровный листок, предварительно засеянный клетками, и промойте его один раз PBS.

Затем инкубируйте клетки с Фурой 2-АМ и раствором Тайроде в течение 30 минут в темноте. Чтобы удалить краситель, инкубируйте клетки с раствором Тироды в течение 10 минут. Затем установите камеру на столик инвертированного флуоресцентного микроскопа, откройте главное окно и перейдите на страницу настроек захвата и камеры.

Нажмите кнопку реального времени, чтобы отобразить изображение в реальном времени. Чтобы получить изображения, нарисуйте несколько линий от руки, чтобы обвести ячейки разными цветами и заранее определить интересующие области. Флуоресцентная микроскопия показала, что введение АТФ повышает внутриклеточный уровень кальция в CD34-положительных стволовых клетках изолированной сосудистой стенки.