Пожертвовав мышь, поместите ее на поролоновую поверхность и закрепите передние конечности скотчем или булавками. С помощью операционных ножниц разрежьте обе задние конечности выше колен. Перенесите каждую заднюю конечность в отдельную камеру для вскрытия, и добавьте холодный раствор Тирода, чтобы покрыть ткани.
Прикрепите первую заднюю конечность к камере вскрытия, убедившись, что задняя поверхность ног видна. Под увеличением удалите кожу, затем обнажите и иссеките сгибатель пальцев или мышцу FDB. Храните мышцы FDB в стеклянном флаконе с этикеткой, содержащем один миллилитр раствора Tyrode.
С помощью тонких ножниц отделите икроножную мышцу, затем иссеките камбаловидную мышцу. Снимите кожу с передней части поверхности ноги. Затем определите дистальные сухожилия передней большеберцовой кости и мышц разгибателя длинного пальца или EDL в области голеностопного сустава.
Удалите и выбросьте большеберцовую кость. Затем разрежьте дистальные сухожилия EDL и продолжайте диссекцию, чтобы полностью удалить мышцу EDL. После выявления длинного разгибателя или мышцы EHL начните рассечение по сухожилию до первого пальца.
Затем определите и проследите за самым внешним сухожилием малоберцовой мышцы, чтобы разорвать его и удалить длинную малоберцовую мышцу или мышцу PL. Определите и проследите сухожилие до четвертого пальца. Затем разрежьте и удалите малоберцовую мышцу digiti quarti или PDQA.
После рассечения второй задней конечности соберите мышцы того же типа в стеклянный флакон с маркировкой, содержащий раствор Тирода. Замените раствор Tyrode в камере препарирования, чтобы удалить мусор и шерсть мыши. Влейте мышцы PL в камеру вскрытия и проверьте их целостность и сокращение.
Выполняйте продольные или диагональные надрезы на камбаловидной мышце вслед за центральным сухожилием, разрезая примерно 80% его длины. Для мышцы EDL следуйте за одним или двумя сухожилиями и разрежьте примерно такую же длину, как камбаловидная мышца. Перенесите каждую пару мышц в новый стеклянный флакон, содержащий три миллиграмма коллагеназы типа 2 в диссоциационном растворе, и инкубируйте их на водяной бане при температуре 37 градусов Цельсия в течение 65-90 минут с легким встряхиванием.
После 65 минут инкубации проверяйте флакон под стереоскопом каждые пять минут. Как только мышца станет рябистой и дряблой, а волокна начнут отделяться, промойте мышцы Тиродом при комнатной температуре, чтобы деактивировать и удалить коллагеназу. С помощью набора отполированных огнем пипеток Пастера перемешайте раствор вокруг мышцы с помощью пипетки с пятимиллиметровым наконечником.
Затем осторожно втяните и вытяните мышцы из кончика три-четыре раза. Когда мышцы начнут высвобождать волокна и станут тоньше, используя четырехмиллиметровый наконечник, повторите процедуру, чтобы отделить больше волокон.
