Регистрация изображения флуоресцентной микроскопии с изображением электронной микроскопии для корреляционной световой и электронной микроскопии

Для начала откройте программное обеспечение для регистрации и найдите EasyCLIMv0. После этого нажмите EasyCLIMv0, выберите «Изображение» или «Последовательность» и выберите «Открыть», чтобы импортировать изображение электронной микроскопии и составные изображения светлопольных и флуоресцентных изображений. В интерфейсе EasyCLIMv0 нажмите на 2D XYT, чтобы выбрать нежесткий 2D или 3D в качестве режима выравнивания.

В окне EasyCLIMv0 нажмите на раскрывающийся список справа от выбранного изображения, которое будет преобразовано и изменено в размере, вероятно, FM, чтобы выбрать композитный RGB цвет tiff, затем щелкните выпадающий список справа от выбранного изображения, которое не будет изменено, вероятно, EM, чтобы выбрать шесть изображений tiff. Нажмите кнопку Начать, чтобы начать процесс регистрации. В окне изображения электронной микроскопии, состоящем из шести изображений, нажмите на наночастицу золота, чтобы поместить на нее 0,1.

В окне изображения флуоресцентной микроскопии композитный RGB цветной tiff. Нажмите на соответствующую наночастицу золота, чтобы поставить на нее 0,1. Затем нажмите кнопку Update Transformation, чтобы подтвердить совмещение сигналов флуоресценции и электронной микроскопии наночастиц золота, и завершите регистрацию, нажав кнопку Stop.

Чтобы экспортировать выровненную подборку изображений, содержащую четырехканальные изображения, щелкните наложенное изображение, выберите «Изображение» или «Эпизод» и нажмите «Сохранить как».Теперь откройте ImageJ, нажмите «Файл» и выберите «Открыть», чтобы импортировать наложенное изображение. Перейдите в раздел «Изображение», нажмите «Подборки», а затем сложите два изображения, чтобы разделить их на четырехканальные изображения. После этого выберите «Изображение» и нажмите «Цвет», а затем «Объединить каналы», чтобы объединить три канала в составное изображение.

Чтобы преобразовать составное изображение в коррелятивное изображение световой и электронной микроскопии, выберите «Изображение», затем выберите «Тип» и нажмите «Цвет RGB».